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xissy

铜虫 (小有名气)

[求助] 溶解包涵体究竟给多少浓度的DTT? 已有1人参与

一般洗涤的时候我是给1mM,溶解的时候给5mM,但是有时溶解不了。想增大DTT的浓度,又担心会有危害。看见有的帖子文献上说给1-5mM的,或者50-100mM的都有。不禁疑惑了,究竟DTT可以给多大的浓度呢?
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imyting

至尊木虫 (正式写手)


xissy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励交流 2014-03-03 12:03:53
这跟你的包涵体形成的原因有关啊,如果不仅仅是由于二硫键造成的,你增加DTT的浓度有什么用呢?
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
2楼2014-03-03 11:54:38
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xissy

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by imyting at 2014-03-03 11:54:38
这跟你的包涵体形成的原因有关啊,如果不仅仅是由于二硫键造成的,你增加DTT的浓度有什么用呢?

蛋白内有链间二硫键的情况下,DDT的浓度为什么差异这么大呢?好像DTT的浓度与二硫键的多少关系不是特别大吧。另外我想知道的是,DTT加多了是否会对蛋白有害?多多少才算多呢?
3楼2014-03-03 14:14:46
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xissy: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-03-04 12:29:45
引用回帖:
3楼: Originally posted by xissy at 2014-03-03 14:14:46
蛋白内有链间二硫键的情况下,DDT的浓度为什么差异这么大呢?好像DTT的浓度与二硫键的多少关系不是特别大吧。另外我想知道的是,DTT加多了是否会对蛋白有害?多多少才算多呢?...

其一,若想溶解包涵体,只加DTT是不够的,要辅助尿素才可以;
其二,要想破坏二硫键的话,DTT的摩尔量要是蛋白中二硫键的100倍左右,如果是保护-SH的话,5-10倍就好了;
其三,你说的过量对蛋白的伤害我不太明白,因为你的蛋白已经是包涵体了,就算溶解了暂时也不会正确折叠的;如果是你觉得会修饰肽链或者打断肽链的话,那你的担心是多余的;所以,我觉得不会存在过量伤害蛋白的问题。
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
4楼2014-03-03 15:09:11
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xissy

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by imyting at 2014-03-03 15:09:11
其一,若想溶解包涵体,只加DTT是不够的,要辅助尿素才可以;
其二,要想破坏二硫键的话,DTT的摩尔量要是蛋白中二硫键的100倍左右,如果是保护-SH的话,5-10倍就好了;
其三,你说的过量对蛋白的伤害我不太明白 ...

谢谢~
5楼2014-03-04 12:29:55
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qiuzhileipo

木虫 (正式写手)

生如夏花

楼主,能不能把你们的lysis buffer的配方给我一份?谢谢!
6楼2015-05-22 09:15:07
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