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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 溶解包涵体究竟给多少浓度的DTT？
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xissy

铜虫 (小有名气)

[求助] 溶解包涵体究竟给多少浓度的DTT？已有1人参与

一般洗涤的时候我是给1mM，溶解的时候给5mM，但是有时溶解不了。想增大DTT的浓度，又担心会有危害。看见有的帖子文献上说给1-5mM的，或者50-100mM的都有。不禁疑惑了，究竟DTT可以给多大的浓度呢？
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1楼2014-03-02 15:10:45
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imyting

至尊木虫 (正式写手)
★
xissy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励交流 2014-03-03 12:03:53
这跟你的包涵体形成的原因有关啊，如果不仅仅是由于二硫键造成的，你增加DTT的浓度有什么用呢？
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悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
2楼2014-03-03 11:54:38
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xissy

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by imyting at 2014-03-03 11:54:38
这跟你的包涵体形成的原因有关啊，如果不仅仅是由于二硫键造成的，你增加DTT的浓度有什么用呢？

蛋白内有链间二硫键的情况下，DDT的浓度为什么差异这么大呢?好像DTT的浓度与二硫键的多少关系不是特别大吧。另外我想知道的是，DTT加多了是否会对蛋白有害？多多少才算多呢？
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3楼2014-03-03 14:14:46
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xissy: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-03-04 12:29:45
引用回帖:
3楼: Originally posted by xissy at 2014-03-03 14:14:46
蛋白内有链间二硫键的情况下，DDT的浓度为什么差异这么大呢?好像DTT的浓度与二硫键的多少关系不是特别大吧。另外我想知道的是，DTT加多了是否会对蛋白有害？多多少才算多呢？...

其一，若想溶解包涵体，只加DTT是不够的，要辅助尿素才可以；
其二，要想破坏二硫键的话，DTT的摩尔量要是蛋白中二硫键的100倍左右，如果是保护-SH的话，5-10倍就好了；
其三，你说的过量对蛋白的伤害我不太明白，因为你的蛋白已经是包涵体了，就算溶解了暂时也不会正确折叠的；如果是你觉得会修饰肽链或者打断肽链的话，那你的担心是多余的；所以，我觉得不会存在过量伤害蛋白的问题。
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悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
4楼2014-03-03 15:09:11
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xissy

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by imyting at 2014-03-03 15:09:11
其一，若想溶解包涵体，只加DTT是不够的，要辅助尿素才可以；
其二，要想破坏二硫键的话，DTT的摩尔量要是蛋白中二硫键的100倍左右，如果是保护-SH的话，5-10倍就好了；
其三，你说的过量对蛋白的伤害我不太明白 ...

谢谢~
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5楼2014-03-04 12:29:55
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qiuzhileipo

木虫 (正式写手)

生如夏花
楼主，能不能把你们的lysis buffer的配方给我一份？谢谢！
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6楼2015-05-22 09:15:07
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