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简单HE认真

木虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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专业: 生物化学

[求助] 包涵体蛋白纯化不溶解，怎麽办？已有2人参与

菌体定位后，目的蛋白在沉淀中，即包涵体表达，但是包含体没办法溶解，请教一下各位该怎麽办?顺便问一下，可否加一点表变活性剂或乙醇以增加疏水性蛋白的溶解...

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简单做人，认真做事。

1楼2012-08-18 15:59:42

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daguo0648

铜虫 (初入文坛)

应助: 7 (幼儿园)
金币: 185.5
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虫号: 982899
注册: 2010-03-26
性别: GG
专业: 蛋白质组学

【答案】应助回帖

小MM，6MGuaHCl和8MUrea都可以溶解包涵体，而且都是可以过His柱的，你是从哪里听说他俩不能上His柱呢？而且GuaHCl增溶效果更好，过柱效果也好，因为本身是高盐可以防止非特异性吸附。你的包涵体最好先用1%triton，50mMTris，50mMnaCl，pH8.0去超声洗涤一下包涵体，然后离心沉淀再用50mMTris，6MGuaHCl，1mMDTT（5mMβ-ME）搅拌增溶3h即可，直接上His柱就行。DTT可以选择性添加，而且浓度不能高，否则不能过his柱会把Ni还原掉。如果搅拌增溶不行可以试试超声，基本不会有哪种包涵体连超声都无法增溶的，祝你好运。