应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问各位前辈们，这样的RNA电泳图能用于RT-PCR吗？
121/2返回列表12下一页
查看: 1697  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yqs129219

新虫 (小有名气)

[求助] 请问各位前辈们，这样的RNA电泳图能用于RT-PCR吗？

上样量是5ul的RNA和1ul的6Xloding Buffer  前面是DNA Marker2000，颜色淡的浓度是不是很低啊

4列为一个样



4列为一个样
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-09 17:48:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenye.judy

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-07-09 21:03:10
跑RNA时，还是先测量下OD值，然后加入等量的RNA（0.5-0.75ug），而不是加入等体积的，可比性不好。根据现在的图，看RNA完整度的话，还可以，勉强能用RT-PCR。当然如果做基因表达量比较的话，尽量用质量好的，一致的ＲＮＡ。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-09 19:46:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yqs129219

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shenye.judy at 2012-07-09 19:46:29
跑RNA时，还是先测量下OD值，然后加入等量的RNA（0.5-0.75ug），而不是加入等体积的，可比性不好。根据现在的图，看RNA完整度的话，还可以，勉强能用RT-PCR。当然如果做基因表达量比较的话，尽量用质量好的，一致的 ...

测OD值也不一定准确的，根据Marker亮度来大致估算RNA浓度。这样可以吧。我是反转录用来做同源克隆的
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-09 20:44:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenye.judy

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-10 13:45:50
反转录用来做同源克隆，那就没那么严格了，你可以直接往下做试试。
另外，如果你提取的质量较好，且质量较一致的话，跑出来的条带亮度基本是一致的（等量的RNA）。
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-10 10:40:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

豆豆5273

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-07-11 13:48:36
我觉得你是上样前未用枪头搅均匀吧，不然，同样的RNA应该是条带亮度一致的啊。。。从亮度来看，可以做反转，分成3管，1管 随机引物，1管特异性引物，1管oligo dT..后面做PCR的引物一定 要好好设计，最好找有经验的人，不同软件分析 后评价都好，再订引物。 一次PCR后上样 如果没条带或者条带浅，就 二次PCR
赞一下 回复此楼
选择生物并为之努力
5楼2012-07-10 20:32:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yqs129219

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 豆豆5273 at 2012-07-10 20:32:56
我觉得你是上样前未用枪头搅均匀吧，不然，同样的RNA应该是条带亮度一致的啊。。。从亮度来看，可以做反转，分成3管，1管 随机引物，1管特异性引物，1管oligo dT..后面做PCR的引物一定 要好好设计，最好找有经验的人 ...

一个样出来的4管，不是4列都是一个EP管里的，一个管里的亮度肯定会一样啦
赞一下 回复此楼
6楼2012-07-11 10:08:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yqs129219

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 豆豆5273 at 2012-07-10 20:32:56
我觉得你是上样前未用枪头搅均匀吧，不然，同样的RNA应该是条带亮度一致的啊。。。从亮度来看，可以做反转，分成3管，1管 随机引物，1管特异性引物，1管oligo dT..后面做PCR的引物一定 要好好设计，最好找有经验的人 ...

二次PCR，重复第一次的么
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-11 10:56:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你上样是不是戳到胶孔了？还是本身有基因组污染？如果不是操作问题的话，我建议你加DNase I消化一下再上样电泳
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-12 08:40:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)
不知道有没有测OD，参考一下OF260/280。点样孔亮可能有杂质（如蛋白）。抽提不干净或转移上清时吸到中间层的蛋白了。下次注意。
赞一下 回复此楼
伟大航线....
9楼2012-07-12 08:57:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feixiang1209

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
挺好的了，反转录前测下浓度保证反转录时的RNA量一致就可以了
赞一下 回复此楼
10楼2012-07-12 08:58:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yqs129219 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 4/200 2026-08-23 20:55 by 0p9y1isJp2jM
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 19:34 by lXgU0RvNTDC9
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 19:31 by lXgU0RvNTDC9
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 19:22 by lXgU0RvNTDC9
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 7/350 2026-08-23 19:10 by lXgU0RvNTDC9
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 5/250 2026-08-23 18:55 by lXgU0RvNTDC9
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 5/250 2026-08-23 14:33 by KM5EcsNQRBPn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 03:40 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 炎黄贵胄 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭