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酶切酶连转化
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各位，请教个问题。 我需要重组构建个质粒，要将A质粒的7kb片段PCR出来（KOD酶），B质粒的1.7kb片段PCR出来（Pfu酶），然后再进行双酶切，酶连，转化（没有好的酶切位点，只有P出来）。 现在遇到的问题是P出来的非特异带很多，目的带回收后浓度非常低15ng/µl（100µl体系），而且目的条带有时有有时没有。然后我还要酶切，再回收，几乎就没有了，然后转感受态，做了n批，都没有阳性克隆，不知道问题出在哪里。求教如何改善？ |
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