应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶切问题求助！！！
141/2返回列表12下一页
查看: 2189  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qianggene

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酶切问题求助！！！ 已有10人参与

各位虫友，小妹有一问题请教，我最近酶切质粒（PMD-18T)总是切的相当不好，不是切不开，而是切开的目的带特别弱，但质粒很亮，是我加的质粒浓度太高了吗，但我保证加的量是小于1微克。我用的酶是ASCI和NCOI，请高手指点，不胜感激！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-05-11 20:13:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lingn

木虫 (正式写手)
★ ★
amisking(金币+2):good！ 2010-05-11 20:39:10
qianggene(金币+1): 2010-05-12 14:53:57
首先，质粒的纯度很重要，如果质粒提的不好，含有太多的蛋白是会影响酶切效果的。
可以适当的放大体系，延长酶切时间，或者多加点酶。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-05-11 20:31:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
amisking(金币+1):good！ 2010-05-13 08:01:01
不知道楼主提完质粒有没有纯化一下~
还有就是酶切的话按照黄金比例添加就行了~
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2010-05-11 21:19:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
qianggene(金币+1): 2010-05-12 14:53:47
不知道楼主目的片段是多大？可能目的条带与载体大小太悬殊了。如果这样，等摩尔情况下，即使全部切开，目的条带也很弱。
赞一下 回复此楼
Thank-you，so-blue.
4楼2010-05-11 21:25:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

todouhy

铜虫 (小有名气)
我想问一下啊，黄金比例是什么意思啊？酶切的时候DNA的量和酶的量的比例，谢谢啊！
赞一下 回复此楼
5楼2010-05-11 21:44:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yinsongna

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2010-05-11 21:19:00:
不知道楼主提完质粒有没有纯化一下~
还有就是酶切的话按照黄金比例添加就行了~

黄金比例是什么啊
赞一下 回复此楼
6楼2010-05-11 22:35:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yinsongna

金虫 (正式写手)
qianggene(金币+1): 2010-05-12 14:54:24
质粒可以测一下OD值，确定加的质粒浓度及蛋白污染程度
不知道楼主的酶切体系是多大，可以用10 ul体系切试试
赞一下 回复此楼
7楼2010-05-11 22:37:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
qianggene(金币+1): 2010-05-12 14:55:30
50ul的体系
10*buffer 5ul
酶 1-2ul
DNA <=2ug
去离子水补至50ul
赞一下 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
8楼2010-05-12 10:50:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
qianggene(金币+1): 2010-05-12 14:54:16
xx微升体系就不用讨论了……浓度配比才是最关键的，而不是体积
楼主可以想象一下，1ug质粒，假设6~8kb，你的目的基因占了1kb，那么切下来之后目的基因会是多少ug？
明白我想讲什么意思了吧
参考4楼的意见吧
赞一下 回复此楼
9楼2010-05-12 13:08:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qianggene

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lingn at 2010-05-11 20:31:11:
首先，质粒的纯度很重要，如果质粒提的不好，含有太多的蛋白是会影响酶切效果的。
可以适当的放大体系，延长酶切时间，或者多加点酶。

请问如果适当多加点酶会不会破坏了体系的比例，加酶的量是个范围吗？
赞一下 回复此楼
10楼2010-05-12 14:57:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qianggene 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +8 大萍1987 2026-08-20 10/500 2026-08-20 21:48 by 大萍1987
[基金申请] 言之凿凿，明天官网会通知放榜？ +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 22/1100 2026-08-20 17:03 by yaoyewhu2008
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭