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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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qianggene

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酶切问题求助!!! 已有10人参与

各位虫友,小妹有一问题请教,我最近酶切质粒(PMD-18T)总是切的相当不好,不是切不开,而是切开的目的带特别弱,但质粒很亮,是我加的质粒浓度太高了吗,但我保证加的量是小于1微克。我用的酶是ASCI和NCOI,请高手指点,不胜感激!
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

qianggene(金币+1): 2010-05-12 14:54:16
xx微升体系就不用讨论了……浓度配比才是最关键的,而不是体积
楼主可以想象一下,1ug质粒,假设6~8kb,你的目的基因占了1kb,那么切下来之后目的基因会是多少ug?
明白我想讲什么意思了吧
参考4楼的意见吧
9楼2010-05-12 13:08:32
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lingn

木虫 (正式写手)

★ ★
amisking(金币+2):good! 2010-05-11 20:39:10
qianggene(金币+1): 2010-05-12 14:53:57
首先,质粒的纯度很重要,如果质粒提的不好,含有太多的蛋白是会影响酶切效果的。
可以适当的放大体系,延长酶切时间,或者多加点酶。
2楼2010-05-11 20:31:11
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen


amisking(金币+1):good! 2010-05-13 08:01:01
不知道楼主提完质粒有没有纯化一下~
还有就是酶切的话按照黄金比例添加就行了~
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2010-05-11 21:19:00
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

qianggene(金币+1): 2010-05-12 14:53:47
不知道楼主目的片段是多大?可能目的条带与载体大小太悬殊了。如果这样,等摩尔情况下,即使全部切开,目的条带也很弱。
Thank-you,so-blue.
4楼2010-05-11 21:25:05
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