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pidou213

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
没有明白是什么意思呢,能在麻烦一下吧
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-05-12 13:08:32:
xx微升体系就不用讨论了……浓度配比才是最关键的,而不是体积
楼主可以想象一下,1ug质粒,假设6~8kb,你的目的基因占了1kb,那么切下来之后目的基因会是多少ug?
明白我想讲什么意思了吧
参考4楼的意见吧

见得多爱的多
11楼2010-05-12 23:30:18
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
商品化的酶50ul两种各家1ul已经很多了。
楼主主要还是要明白质粒本身和目的片段之间的长度比是多少,如果完全切开亮度比是多少?如果没有双酶切,单酶切的条带又占了多少?
明白了这些问题再给酶切的效率下个片段,做一次克隆,我一般都是800ng左右的20ul切开做胶回收,目的片段回收完后的浓度一般很低,在25ng/ul左右,但取个6ul做酶连转化也很够了
终于熬成木虫了……
12楼2010-05-13 03:09:29
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2010-05-12 23:30:18:
没有明白是什么意思呢,能在麻烦一下吧



意思就是说,切下来的目的片段只有1/n ug,当然条带很模糊,所以一般直接酶切了回收,是要加大质粒的量以保证目的片段能够更多地被收回来
13楼2010-05-13 12:45:55
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guojndx

金虫 (小有名气)

生物催化小虫


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
质粒经纯化后再酶切,另外可以看一下这两种酶的最适温度是否相同,可以 考虑用10ul体系,用两步酶切试试,适当延长酶切时间,第一部酶切后要纯化再进行第二部酶切
14楼2010-05-14 12:48:52
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