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pidou213

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没有明白是什么意思呢，能在麻烦一下吧
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-05-12 13:08:32:
xx微升体系就不用讨论了……浓度配比才是最关键的，而不是体积
楼主可以想象一下，1ug质粒，假设6~8kb，你的目的基因占了1kb，那么切下来之后目的基因会是多少ug？
明白我想讲什么意思了吧
参考4楼的意见吧

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见得多爱的多
11楼2010-05-12 23:30:18
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
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商品化的酶50ul两种各家1ul已经很多了。
楼主主要还是要明白质粒本身和目的片段之间的长度比是多少，如果完全切开亮度比是多少？如果没有双酶切，单酶切的条带又占了多少？
明白了这些问题再给酶切的效率下个片段，做一次克隆，我一般都是800ng左右的20ul切开做胶回收，目的片段回收完后的浓度一般很低，在25ng/ul左右，但取个6ul做酶连转化也很够了
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终于熬成木虫了……
12楼2010-05-13 03:09:29
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2010-05-12 23:30:18:
没有明白是什么意思呢，能在麻烦一下吧



意思就是说，切下来的目的片段只有1/n ug，当然条带很模糊，所以一般直接酶切了回收，是要加大质粒的量以保证目的片段能够更多地被收回来
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13楼2010-05-13 12:45:55
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guojndx

金虫 (小有名气)

生物催化小虫
★
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质粒经纯化后再酶切，另外可以看一下这两种酶的最适温度是否相同，可以 考虑用10ul体系，用两步酶切试试，适当延长酶切时间，第一部酶切后要纯化再进行第二部酶切
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14楼2010-05-14 12:48:52
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