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qianggene

铜虫 (小有名气)

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专业: 食品科学基础

[交流] 【求助/交流】酶切问题求助！！！已有10人参与

各位虫友，小妹有一问题请教，我最近酶切质粒（PMD-18T)总是切的相当不好，不是切不开，而是切开的目的带特别弱，但质粒很亮，是我加的质粒浓度太高了吗，但我保证加的量是小于1微克。我用的酶是ASCI和NCOI，请高手指点，不胜感激！

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1楼 2010-05-11 20:13:16

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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上

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性别: MM
专业: 微生物/分子生物学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

商品化的酶50ul两种各家1ul已经很多了。
楼主主要还是要明白质粒本身和目的片段之间的长度比是多少，如果完全切开亮度比是多少？如果没有双酶切，单酶切的条带又占了多少？
明白了这些问题再给酶切的效率下个片段，做一次克隆，我一般都是800ng左右的20ul切开做胶回收，目的片段回收完后的浓度一般很低，在25ng/ul左右，但取个6ul做酶连转化也很够了