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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切酶连转化
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郝连芷水

木虫 (小有名气)
我觉得可能是我胶回收产生了高盐溶液，而且我酶切因为pcr产物浓度低所以没有加水，全加的dna酶切，可能是高盐溶液抑制酶活，所以酶切连接不成功，我要试试加大体系来，降低盐浓度来试试。谢谢大家。
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11楼2011-12-27 19:36:47
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erlangshen89

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yuandian114 at 2011-12-26 13:48:15
切胶回收，将胶回收的PCR产物直接作为模板再做PCR，不过能这里头有个小技巧lz可以参考一下，就是讲退火温度提高，这个经过我自己验证了N次，绝对可以减少非特异性条带，哈哈，希望对lz有帮助，也希望lz实验顺利

请问是将胶回收的目的PCR片段做模板再进行PCR吗？我试过将融合出来的片段做模板，没有扩增出条带，再者就是将退火温度提高，一般提高到多少度？用两步法合适吗？
谢谢啦期待回复
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12楼2012-11-22 21:00:38
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