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郝连芷水

木虫 (小有名气)

我觉得可能是我胶回收产生了高盐溶液,而且我酶切因为pcr产物浓度低所以没有加水,全加的dna酶切,可能是高盐溶液抑制酶活,所以酶切连接不成功,我要试试加大体系来,降低盐浓度来试试。谢谢大家。
11楼2011-12-27 19:36:47
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erlangshen89

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yuandian114 at 2011-12-26 13:48:15
切胶回收,将胶回收的PCR产物直接作为模板再做PCR,不过能这里头有个小技巧lz可以参考一下,就是讲退火温度提高,这个经过我自己验证了N次,绝对可以减少非特异性条带,哈哈,希望对lz有帮助,也希望lz实验顺利

请问是将胶回收的目的PCR片段做模板再进行PCR吗?我试过将融合出来的片段做模板,没有扩增出条带,再者就是将退火温度提高,一般提高到多少度?用两步法合适吗?
谢谢啦期待回复
12楼2012-11-22 21:00:38
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