应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切酶连转化
21/1返回列表
查看: 2879  |  回复: 11
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

郝连芷水

木虫 (小有名气)

[求助] 酶切酶连转化

各位，请教个问题。
我需要重组构建个质粒，要将A质粒的7kb片段PCR出来（KOD酶），B质粒的1.7kb片段PCR出来（Pfu酶），然后再进行双酶切，酶连，转化（没有好的酶切位点，只有P出来）。
现在遇到的问题是P出来的非特异带很多，目的带回收后浓度非常低15ng/µl（100µl体系），而且目的条带有时有有时没有。然后我还要酶切，再回收，几乎就没有了，然后转感受态，做了n批，都没有阳性克隆，不知道问题出在哪里。求教如何改善？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-12-25 20:42:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-12-26 11:40:18
切胶回收来的可以再进行PCR，扩大量，切胶回收来的那一部分可以直接作为模板保存
赞一下(1人) 回复此楼
悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
3楼2011-12-26 09:36:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 郝连芷水 的主题更新
21/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭