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zxd95至尊木虫 (著名写手)
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[交流]
【求助/交流】蛋白质纯化的疑难问题已有10人参与
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年前就做蛋白纯化，该蛋白使用pET-32a表达，分子量约34kDa，表达菌为Rosetta(DE3),因为宿主菌本身在35kDa左右就有表达； 使用HisTrap 1ml镍柱纯化后发现，目标蛋白和宿主菌35kDa左右蛋白均挂柱，我是使用说明书推荐的Buffer(20mM磷酸缓冲液 + 0.5M NaCl + 30、60、100、150、200、250、300、500mM咪唑，pH7.4)梯度洗脱的，发现在100和150mM咪唑下，目标蛋白和35kDa杂蛋白均洗脱。 割胶回收也做不出来，郁闷中！！！！！！！！！！  请虫友们指导！ 谢谢！  [ Last edited by zxd95 on 2011-3-28 at 12:15 ] |
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4楼2011-03-14 16:32:27