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日月当空

铁虫 (初入文坛)

[求助] 纯化蛋白质时，用Miracloth过滤

求纯化蛋白质时，用Miracloth过滤的具体步骤。Miracloth的孔径是多少？过滤的时候可以用其他什么的滤膜代替吗？
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1楼 2012-10-24 14:19:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-26 13:36:30
Miracloth只能除去非常大的不溶物，一般用于破碎后除去组织不溶物，孔径大小是22-25um，一般的细胞、细菌都可以过，不知道对你纯化蛋白有什么用。如果你想上柱，必须用微孔滤膜。
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2楼2012-10-25 06:58:46
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日月当空

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-25 06:58:46
Miracloth只能除去非常大的不溶物，一般用于破碎后除去组织不溶物，孔径大小是22-25um，一般的细胞、细菌都可以过，不知道对你纯化蛋白有什么用。如果你想上柱，必须用微孔滤膜。

我看的一篇外文的，是用Miracloth。请问一下我如果用微孔滤膜，得用多大孔径的呀？我纯化的蛋白质大概在20kD左右
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3楼2012-10-26 09:31:44
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-27 15:49:51
可以用0.22或者0.45um的微孔滤膜。一般蛋白质分子很小的，即使大的蛋白复合体的直径也是在nm级别的。一般纯化蛋白样品想上普通分离柱的话最好过滤，如果要上HPLC必须过滤。
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4楼2012-10-27 06:58:07
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日月当空

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-27 06:58:07
可以用0.22或者0.45um的微孔滤膜。一般蛋白质分子很小的，即使大的蛋白复合体的直径也是在nm级别的。一般纯化蛋白样品想上普通分离柱的话最好过滤，如果要上HPLC必须过滤。

那0.22或0.45的微孔滤膜有什么区别？应该选用哪种呢?
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5楼2012-10-28 19:16:16
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
日月当空: 金币+2, ★有帮助 2012-10-29 08:09:39
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-29 15:46:33
引用回帖:
5楼: Originally posted by 日月当空 at 2012-10-28 19:16:16
那0.22或0.45的微孔滤膜有什么区别？应该选用哪种呢?...

区别不是很大。0.22um的孔径稍微小一些，过滤后的样品更细，上柱子更好一些。但有些样品比较粘稠，过0.22的膜不是很容易。
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6楼2012-10-29 00:34:00
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