应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白纯化镍柱、分子筛
101/1返回列表
查看: 2944  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

256k

新虫 (正式写手)

[求助] 蛋白纯化镍柱、分子筛

用tris-hcl ph8的缓冲液破菌、溶解蛋白

上镍柱时用tris-hcl ph8，200mM咪唑洗脱蛋白下来

问题：上分子筛的平衡缓冲液和洗脱缓冲液用什么？加不加咪唑呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-11-20 11:28:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

sspxiaoji

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
256k(金币+3): 过镍柱用500mM咪唑洗脱冻于-30度，今天拿出蛋白冰上冻融后发现沉淀不少，如何避免沉淀有没有好的建议？ 2011-11-22 10:50:28
silicare(金币+3, BioEPI+1): 2011-11-22 12:42:00
就单纯分子筛的话，对缓冲液要求不高，大部分缓冲液都可以。但是分子筛经常用来对样品脱盐或替换缓冲液，然后进行后续处理，如酶切，进一步纯化等。也就是说你过了镍柱后，要把样品里的咪唑或TRIS替换成其他的缓冲液，直接用你所需要的缓冲液平衡柱子，然后上样。分子筛一般没有洗脱这个概念，就用一个缓冲液走就可以了。建议可以看看分子筛的原理，很容易理解的。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

256k
5楼2011-11-21 12:01:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励积极应助！ 2011-11-20 17:18:54
256k(金币+2): 谢谢 ，说的很好 2011-11-22 10:47:12
分子筛还可以用tris-hcl ph8，毕竟你在镍柱时用的是这个缓冲液！平衡缓冲液和洗脱缓冲液均用它！过分子筛当然不能用咪唑了，用 咪唑干吗！
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-11-20 11:31:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
先搞清出程序吧。
看看咪唑的作用是干嘛的。
分子筛也没有平衡与洗脱缓冲液的区分。
建议楼主先辨明各种概念。
赞一下 回复此楼
3楼2011-11-20 20:34:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doublehelix

木虫 (著名写手)
LZ所谓的平衡我想应该就是指洗柱吧 ，我们也叫平衡....其实分子筛中只有一有缓冲液，只是起的作用不同，呵呵
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

256k
4楼2011-11-21 00:04:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haoziying

至尊木虫 (职业作家)
以上各位说的都挺对的。
亲和柱和分子筛的分离原理是不一样的。过分子筛可以去掉过镍柱时的咪唑，对后续试验有帮助。
过分子筛建议你用最后你想保存的缓冲液，之后再用PBS或者TRIS-Hcl把筛子筛平衡了就行了。保存时加上防腐剂，或者乙醇。
赞一下 回复此楼
6楼2011-11-21 22:34:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

256k

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by doublehelix at 2011-11-20 11:31:33:
分子筛还可以用tris-hcl ph8，毕竟你在镍柱时用的是这个缓冲液！平衡缓冲液和洗脱缓冲液均用它！过分子筛当然不能用咪唑了，用 咪唑干吗！

批评的对！
回复此楼
7楼2011-11-22 10:47:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

256k

新虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by doublehelix at 2011-11-21 00:04:37:
LZ所谓的平衡我想应该就是指洗柱吧 ，我们也叫平衡....其实分子筛中只有一有缓冲液，只是起的作用不同，呵呵

谢谢指教
回复此楼
8楼2011-11-22 10:51:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

256k

新虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by sspxiaoji at 2011-11-21 12:01:18:
就单纯分子筛的话，对缓冲液要求不高，大部分缓冲液都可以。但是分子筛经常用来对样品脱盐或替换缓冲液，然后进行后续处理，如酶切，进一步纯化等。也就是说你过了镍柱后，要把样品里的咪唑或TRIS替换成其他的缓冲 ...

谢谢指教
回复此楼
9楼2011-11-22 10:52:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sspxiaoji

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sspxiaoji at 2011-11-21 12:01:18:
就单纯分子筛的话，对缓冲液要求不高，大部分缓冲液都可以。但是分子筛经常用来对样品脱盐或替换缓冲液，然后进行后续处理，如酶切，进一步纯化等。也就是说你过了镍柱后，要把样品里的咪唑或TRIS替换成其他的缓冲 ...

这个问题比较复杂。总体来说，蛋白质在高盐条件下是不稳定的。加上冻融之后，沉淀也不奇怪。如果要真的一个个条件去排查，有很多实验可以做。如果只是贮存过夜，我更建议储存在4度就好了，如果可以稀释几倍那更加保险。如果存储时间较长，更低的温度也许有帮助，比如-70度，同样，能稀释一下更好。
赞一下 回复此楼
10楼2011-11-22 17:32:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 256k 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 01:21 by mibUvS8DDCwf
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:21 by mibUvS8DDCwf
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:12 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 23:45 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-14 23:21 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-14 23:09 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:01 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:00 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:33 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:24 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 18:01 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-14 15:37 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-14 15:21 by Aj1rhIDL5ixY
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 15:09 by Aj1rhIDL5ixY
[基金申请] 求教各位大神：2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀？ +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭