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256k

新虫 (正式写手)

[求助] 蛋白纯化镍柱、分子筛

用tris-hcl ph8的缓冲液破菌、溶解蛋白

上镍柱时用tris-hcl ph8,200mM咪唑洗脱蛋白下来

问题:上分子筛的平衡缓冲液和洗脱缓冲液用什么?加不加咪唑呢?
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haoziying

至尊木虫 (职业作家)

以上各位说的都挺对的。
亲和柱和分子筛的分离原理是不一样的。过分子筛可以去掉过镍柱时的咪唑,对后续试验有帮助。
过分子筛建议你用最后你想保存的缓冲液,之后再用PBS或者TRIS-Hcl把筛子筛平衡了就行了。保存时加上防腐剂,或者乙醇。
6楼2011-11-21 22:34:58
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查看全部 10 个回答

doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励积极应助! 2011-11-20 17:18:54
256k(金币+2): 谢谢 ,说的很好 2011-11-22 10:47:12
分子筛还可以用tris-hcl ph8,毕竟你在镍柱时用的是这个缓冲液!平衡缓冲液和洗脱缓冲液均用它!过分子筛当然不能用咪唑了,用 咪唑干吗!
2楼2011-11-20 11:31:33
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月月大可

木虫 (著名写手)

先搞清出程序吧。
看看咪唑的作用是干嘛的。
分子筛也没有平衡与洗脱缓冲液的区分。
建议楼主先辨明各种概念。
3楼2011-11-20 20:34:12
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doublehelix

木虫 (著名写手)

LZ所谓的平衡我想应该就是指洗柱吧 ,我们也叫平衡....其实分子筛中只有一有缓冲液,只是起的作用不同,呵呵

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2011-11-21 00:04:37
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