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蛋白纯化镍柱、分子筛
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用tris-hcl ph8的缓冲液破菌、溶解蛋白 上镍柱时用tris-hcl ph8，200mM咪唑洗脱蛋白下来 问题：上分子筛的平衡缓冲液和洗脱缓冲液用什么？加不加咪唑呢？ |
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3楼2011-11-20 20:34:12
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256k4楼2011-11-21 00:04:37
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【答案】应助回帖
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256k(金币+3): 过镍柱用500mM咪唑洗脱冻于-30度，今天拿出蛋白冰上冻融后发现沉淀不少，如何避免沉淀有没有好的建议？ 2011-11-22 10:50:28
silicare(金币+3, BioEPI+1): 2011-11-22 12:42:00
256k(金币+3): 过镍柱用500mM咪唑洗脱冻于-30度，今天拿出蛋白冰上冻融后发现沉淀不少，如何避免沉淀有没有好的建议？ 2011-11-22 10:50:28
silicare(金币+3, BioEPI+1): 2011-11-22 12:42:00
| 就单纯分子筛的话，对缓冲液要求不高，大部分缓冲液都可以。但是分子筛经常用来对样品脱盐或替换缓冲液，然后进行后续处理，如酶切，进一步纯化等。也就是说你过了镍柱后，要把样品里的咪唑或TRIS替换成其他的缓冲液，直接用你所需要的缓冲液平衡柱子，然后上样。分子筛一般没有洗脱这个概念，就用一个缓冲液走就可以了。建议可以看看分子筛的原理，很容易理解的。 |
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5楼2011-11-21 12:01:18
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