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汕头大学海洋科学接受调剂
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256k

新虫 (正式写手)

[求助] 蛋白纯化镍柱、分子筛

用tris-hcl ph8的缓冲液破菌、溶解蛋白

上镍柱时用tris-hcl ph8,200mM咪唑洗脱蛋白下来

问题:上分子筛的平衡缓冲液和洗脱缓冲液用什么?加不加咪唑呢?
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sspxiaoji

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
256k(金币+3): 过镍柱用500mM咪唑洗脱冻于-30度,今天拿出蛋白冰上冻融后发现沉淀不少,如何避免沉淀有没有好的建议? 2011-11-22 10:50:28
silicare(金币+3, BioEPI+1): 2011-11-22 12:42:00
就单纯分子筛的话,对缓冲液要求不高,大部分缓冲液都可以。但是分子筛经常用来对样品脱盐或替换缓冲液,然后进行后续处理,如酶切,进一步纯化等。也就是说你过了镍柱后,要把样品里的咪唑或TRIS替换成其他的缓冲液,直接用你所需要的缓冲液平衡柱子,然后上样。分子筛一般没有洗脱这个概念,就用一个缓冲液走就可以了。建议可以看看分子筛的原理,很容易理解的。

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5楼2011-11-21 12:01:18
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励积极应助! 2011-11-20 17:18:54
256k(金币+2): 谢谢 ,说的很好 2011-11-22 10:47:12
分子筛还可以用tris-hcl ph8,毕竟你在镍柱时用的是这个缓冲液!平衡缓冲液和洗脱缓冲液均用它!过分子筛当然不能用咪唑了,用 咪唑干吗!
2楼2011-11-20 11:31:33
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月月大可

木虫 (著名写手)

先搞清出程序吧。
看看咪唑的作用是干嘛的。
分子筛也没有平衡与洗脱缓冲液的区分。
建议楼主先辨明各种概念。
3楼2011-11-20 20:34:12
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doublehelix

木虫 (著名写手)

LZ所谓的平衡我想应该就是指洗柱吧 ,我们也叫平衡....其实分子筛中只有一有缓冲液,只是起的作用不同,呵呵

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4楼2011-11-21 00:04:37
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