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新虫 (正式写手)

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[求助] 蛋白纯化镍柱、分子筛

用tris-hcl ph8的缓冲液破菌、溶解蛋白

上镍柱时用tris-hcl ph8，200mM咪唑洗脱蛋白下来

问题：上分子筛的平衡缓冲液和洗脱缓冲液用什么？加不加咪唑呢？

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1楼 2011-11-20 11:28:08

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sspxiaoji

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引用回帖:

5楼: Originally posted by sspxiaoji at 2011-11-21 12:01:18:
就单纯分子筛的话，对缓冲液要求不高，大部分缓冲液都可以。但是分子筛经常用来对样品脱盐或替换缓冲液，然后进行后续处理，如酶切，进一步纯化等。也就是说你过了镍柱后，要把样品里的咪唑或TRIS替换成其他的缓冲 ...

这个问题比较复杂。总体来说，蛋白质在高盐条件下是不稳定的。加上冻融之后，沉淀也不奇怪。如果要真的一个个条件去排查，有很多实验可以做。如果只是贮存过夜，我更建议储存在4度就好了，如果可以稀释几倍那更加保险。如果存储时间较长，更低的温度也许有帮助，比如-70度，同样，能稀释一下更好。