24小时热门版块排行榜    

查看: 2881  |  回复: 9
本帖产生 1 个 BioEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

256k

新虫 (正式写手)

[求助] 蛋白纯化镍柱、分子筛

用tris-hcl ph8的缓冲液破菌、溶解蛋白

上镍柱时用tris-hcl ph8,200mM咪唑洗脱蛋白下来

问题:上分子筛的平衡缓冲液和洗脱缓冲液用什么?加不加咪唑呢?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sspxiaoji

银虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by sspxiaoji at 2011-11-21 12:01:18:
就单纯分子筛的话,对缓冲液要求不高,大部分缓冲液都可以。但是分子筛经常用来对样品脱盐或替换缓冲液,然后进行后续处理,如酶切,进一步纯化等。也就是说你过了镍柱后,要把样品里的咪唑或TRIS替换成其他的缓冲 ...

这个问题比较复杂。总体来说,蛋白质在高盐条件下是不稳定的。加上冻融之后,沉淀也不奇怪。如果要真的一个个条件去排查,有很多实验可以做。如果只是贮存过夜,我更建议储存在4度就好了,如果可以稀释几倍那更加保险。如果存储时间较长,更低的温度也许有帮助,比如-70度,同样,能稀释一下更好。
10楼2011-11-22 17:32:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励积极应助! 2011-11-20 17:18:54
256k(金币+2): 谢谢 ,说的很好 2011-11-22 10:47:12
分子筛还可以用tris-hcl ph8,毕竟你在镍柱时用的是这个缓冲液!平衡缓冲液和洗脱缓冲液均用它!过分子筛当然不能用咪唑了,用 咪唑干吗!
2楼2011-11-20 11:31:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)

先搞清出程序吧。
看看咪唑的作用是干嘛的。
分子筛也没有平衡与洗脱缓冲液的区分。
建议楼主先辨明各种概念。
3楼2011-11-20 20:34:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doublehelix

木虫 (著名写手)

LZ所谓的平衡我想应该就是指洗柱吧 ,我们也叫平衡....其实分子筛中只有一有缓冲液,只是起的作用不同,呵呵

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2011-11-21 00:04:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +30 医学老男孩 2026-08-13 65/3250 2026-08-15 22:31 by zxy7909
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +8 majunge000 2026-08-11 10/500 2026-08-15 18:55 by Equinoxhua
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +7 Ldrop2023 2026-08-13 7/350 2026-08-15 15:57 by mzhh2000
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见