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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR问题求助
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star1987

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】PCR问题求助

请教高手一个问题，我做PCR的时候用上海生工DNA Taq polymerase（红盖子的）（退火温度梯度从45度到65度）都能P出来，而且条带很亮，但是用LA Taq polymerase、Ex Taq polymerase和Prime Star都P不出来。这是什么原因？
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1楼 2010-12-21 15:28:59
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adslye

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wangy0908 at 2010-12-22 12:03:59:

我想问过初级的问题，酶切后P与酶切前P有什么区别的呢？？是模板接触的程度有关还是什么的呢？另外，就是怎样判断你要P的区域是否有酶切位点？因为如果有酶切位点的话，也P不出来的啊。因为我做的是小麦的基因 ...

这个为啥基因组要酶切，我没有资料给你。我也是被口传口教授的。但可以想象下~~~空间上的关系~~不过，我偶尔偷懒用基因组直接P都能P出来。
另外至于酶切位点，除非你人品灰常差，否则应该没问题。5个识别位点的切点平均4的5次方才出现一个~当然不排除个别序列的特殊情况。

我想问你下，你如何确定你的引物一定能P出条带，既然你的目的条带未知。
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24楼2010-12-22 15:46:13
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
star1987(金币+1):谢谢 2010-12-21 16:21:28
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-21 19:07:20
不同的酶，条件有所不同吧。这种情况我也碰到过，当时是提高了退火温度
普通taq，好像比较容易P出来，高保真的没那么简单。当时师兄这样解释给我听
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3楼2010-12-21 16:11:55
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star1987

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by sxxuan at 2010-12-21 16:11:55:
不同的酶，条件有所不同吧。这种情况我也碰到过，当时是提高了退火温度
普通taq，好像比较容易P出来，高保真的没那么简单。当时师兄这样解释给我听

不同的酶条件是不一样，但我用高保真的酶也做了温度梯度，还是P不出来。
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4楼2010-12-21 16:21:09
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天使托

专家顾问 (职业作家)
其实有时就是这样的情况，所以建议一直用一个公司的一种酶！
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5楼2010-12-21 16:23:26
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