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star1987

木虫 (著名写手)

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[交流] 【求助/交流】PCR问题求助

请教高手一个问题，我做PCR的时候用上海生工DNA Taq polymerase（红盖子的）（退火温度梯度从45度到65度）都能P出来，而且条带很亮，但是用LA Taq polymerase、Ex Taq polymerase和Prime Star都P不出来。这是什么原因？

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1楼 2010-12-21 15:28:59

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银虫 (正式写手)

引用回帖:

Originally posted by wangy0908 at 2010-12-22 12:03:59:

我想问过初级的问题，酶切后P与酶切前P有什么区别的呢？？是模板接触的程度有关还是什么的呢？另外，就是怎样判断你要P的区域是否有酶切位点？因为如果有酶切位点的话，也P不出来的啊。因为我做的是小麦的基因 ...

这个为啥基因组要酶切，我没有资料给你。我也是被口传口教授的。但可以想象下~~~空间上的关系~~不过，我偶尔偷懒用基因组直接P都能P出来。
另外至于酶切位点，除非你人品灰常差，否则应该没问题。5个识别位点的切点平均4的5次方才出现一个~当然不排除个别序列的特殊情况。

我想问你下，你如何确定你的引物一定能P出条带，既然你的目的条带未知。