24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

star1987

木虫 (著名写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1361.6
帖子: 2294
在线: 235.5小时
虫号: 859783

[交流] 【求助/交流】PCR问题求助

请教高手一个问题，我做PCR的时候用上海生工DNA Taq polymerase（红盖子的）（退火温度梯度从45度到65度）都能P出来，而且条带很亮，但是用LA Taq polymerase、Ex Taq polymerase和Prime Star都P不出来。这是什么原因？

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2010-12-21 15:28:59

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

adslye

银虫 (正式写手)

★ ★ ★
silicare(金币+3):很热心的说~ 2010-12-22 11:53:29
star1987(金币+2):非常感谢！ 2010-12-24 16:34:58

引用回帖:

Originally posted by star1987 at 2010-12-21 20:24:37:

模板是基因组。关键是高保真的酶P不出来。谢谢！

基因组最好要酶切~生工的酶的确效率很高，但有时候P出的那是啥啊！不敢恭维~~
我最近也是再做这个，恰好酶用的和你一样，生工，TAKARA LA, 还有一个2Xmix的。

因为，我是基因组酶切后P的，所以都能P出来，我这的问题是2K以上的片段只能LA来P。

总之我的建议是：
1，确定你的基因组的纯化做的OK，没有酚什么残留。
2，如果你还用基因组P，那就稀释下做模板。
3，强烈建议酶切乙醇纯化后再P。5,6个识别碱基的酶都可以~
4，确定生工P出来的东西是对的,可能就是假阳性，那个效率太高的东西不一定可靠。