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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR问题求助
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star1987

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】PCR问题求助

请教高手一个问题，我做PCR的时候用上海生工DNA Taq polymerase（红盖子的）（退火温度梯度从45度到65度）都能P出来，而且条带很亮，但是用LA Taq polymerase、Ex Taq polymerase和Prime Star都P不出来。这是什么原因？
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1楼 2010-12-21 15:28:59
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rioarsenal

金虫 (正式写手)
★ ★
silicare(金币+2):谢谢参与 2010-12-22 11:53:10
star1987(金币+2):谢谢 2010-12-24 16:33:45
引用回帖:
Originally posted by star1987 at 2010-12-21 23:16:15:

是平行试验，模板序列如下：
ATGTGTTCTTCAATGACAATTAAATCGCTACAAGGTGATATTTTCTGGGGCCGGACCATGGATTACAACACCAGTTTCTTTCATGAATCACCAGTCGGCGGGGTTCCTGGTAAAATTGTCAGTTTGCCAGCAAACAAGGCATTACCAACACAAAGTGCCAAATGGAC ...

刚才分析了一下这个序列的限制酶切点。有这样一个办法，楼主多提一些模板DNA（基因组），浓缩纯化，然后用EcoRI或者HindIII消化模板DNA，也可两种酶一起消化。目的是使模板变小，容易和引物结合。然后再做PCR。你试试看
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16楼2010-12-22 04:14:56
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
star1987(金币+1):谢谢 2010-12-21 16:21:28
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-21 19:07:20
不同的酶，条件有所不同吧。这种情况我也碰到过，当时是提高了退火温度
普通taq，好像比较容易P出来，高保真的没那么简单。当时师兄这样解释给我听
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3楼2010-12-21 16:11:55
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star1987

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by sxxuan at 2010-12-21 16:11:55:
不同的酶，条件有所不同吧。这种情况我也碰到过，当时是提高了退火温度
普通taq，好像比较容易P出来，高保真的没那么简单。当时师兄这样解释给我听

不同的酶条件是不一样，但我用高保真的酶也做了温度梯度，还是P不出来。
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4楼2010-12-21 16:21:09
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天使托

专家顾问 (职业作家)
其实有时就是这样的情况，所以建议一直用一个公司的一种酶！
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5楼2010-12-21 16:23:26
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