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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR问题求助
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star1987

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】PCR问题求助

请教高手一个问题，我做PCR的时候用上海生工DNA Taq polymerase（红盖子的）（退火温度梯度从45度到65度）都能P出来，而且条带很亮，但是用LA Taq polymerase、Ex Taq polymerase和Prime Star都P不出来。这是什么原因？
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1楼 2010-12-21 15:28:59
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star1987

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-21 22:10:43:


楼主做的是平行试验么？用同样的模板（同一个DNA样品）做模板，不同的酶做的PCR么？最好上一个模板DNA的图，大家研究研究

是平行试验，模板序列如下：
ATGTGTTCTTCAATGACAATTAAATCGCTACAAGGTGATATTTTCTGGGGCCGGACCATGGATTACAACACCAGTTTCTTTCATGAATCACCAGTCGGCGGGGTTCCTGGTAAAATTGTCAGTTTGCCAGCAAACAAGGCATTACCAACACAAAGTGCCAAATGGACCACAAAGTATGCAGCGGTTGGCGTCGGTATTGATCAAAGTACGGCACTTTTCGACGGCGTCAATAGCGAAGGCTTGGCTGGCGACTTGCAGGTTTTGGTAGAGTGCAGCTGGGCGAGTGCGGATTCTTTGAAACAGCGTGGGCTGAAAGCTATTAAAGGCGAGGAGTTTGTGACCTTGGCCTTGACGACATGCAAAAATGTTGACGAAGTACGCGCTTTGGCGGGTGAGTATGGCCTGCTGGATGAACCTTATGAGTTTGGCGGCCAAGGGGTGAAAATCCCATTACATTACACATTTGTTGATCCATCAGGTAAGGGGATTGTTGTCGAACCAACCGATCACGGCGCCTTTAAGCTGTATGATAGCATCGGCGCCATGACGAATAGTCCTGAATACGGGTGGCATGAAACCAATTTGCGCAATTATGTCAGTCTGAATGACAATAACTATCCTAAGGGGTCCGAATTAGGCGACTACCATATTGAGCCGATTGAGTTAGGCACAGGCTACGGGATGTTCGGTTTGCCAGGCGATTACACATCACCATCGCGGTTTCTGCGGGCAATGTTTGTTTCGCGTAATCTTGATCCCTTCAATAGCAAAGACGGCATTCGCGTATTATACAATGCTTTCAAGACTGTCTTGATTCCGCAGGGGCTAGGTCGCGACCCACAACATCAGGTTTTAACGGATTACACGCAGTACTGGTCTGGCTATGATCTGACGAAAAAGACAATTTTCGTGCAAGATTCAGACACATTGACAATGACAACGAAAACACTTGATCCGACTATTACTGACGTCACTTATGAAGATTTGGCTAAAACTGAACAGTTCAATCAACTGTAG
上游引物：CGGGATCCGATGTGTTCTTCAATGACAATTAAATCGC
下游引物：CCCAAGCTTCTACAGTTGATTGAACTGTTCAGTTTTAGC
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15楼2010-12-21 23:16:15
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
star1987(金币+1):谢谢 2010-12-21 16:21:28
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-21 19:07:20
不同的酶，条件有所不同吧。这种情况我也碰到过，当时是提高了退火温度
普通taq，好像比较容易P出来，高保真的没那么简单。当时师兄这样解释给我听
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3楼2010-12-21 16:11:55
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star1987

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by sxxuan at 2010-12-21 16:11:55:
不同的酶，条件有所不同吧。这种情况我也碰到过，当时是提高了退火温度
普通taq，好像比较容易P出来，高保真的没那么简单。当时师兄这样解释给我听

不同的酶条件是不一样，但我用高保真的酶也做了温度梯度，还是P不出来。
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4楼2010-12-21 16:21:09
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天使托

专家顾问 (职业作家)
其实有时就是这样的情况，所以建议一直用一个公司的一种酶！
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5楼2010-12-21 16:23:26
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