应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR求助
131/2返回列表12下一页
查看: 1532  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhtongshi

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR求助

pcr实验
    做总DNA的PCR时，第一次能成功的做出来，而且做得非常好，但接下来再怎么做都失败。非常着急，请高人指点！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-23 10:07:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiangfeng

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+5):欢迎分享经验！ 2010-09-23 19:02:22
zhtongshi(金币+1): 2010-09-28 09:26:24
我认为原因主要有两个：
1. 你第一次成功可能是总DNA提取后就立即做PCR，这时总DNA是完整的，
总DNA放一段时间后，总DNA已降解或受到损伤，使目的基因无法获得
2. 可能是你做PCR时用到的试剂出问题了，可以换用新试剂试试
另外，再问一下，你是用什么试剂提取的总DNA？
PCR时，都用的哪些公司的试剂？
赞一下(1人) 回复此楼
顺势而行，问心无愧！
2楼2010-09-23 10:31:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixg

铁杆木虫 (正式写手)
提取DNA后最好在4度放置，以避免反复冻融引起DNA降解。
赞一下 回复此楼
3楼2010-09-23 13:44:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxb-abc

银虫 (小有名气)
zhtongshi(金币+1): 2010-09-28 09:26:34
所双蒸水，枪头，灭菌再用，可能你的加样有问题吧！ DNA没问题，下游试验就考虑引物，酶，dNTPS等
赞一下 回复此楼
4楼2010-09-23 16:49:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

green1223
引用回帖:
Originally posted by cxb-abc at 2010-09-23 16:49:40:
所双蒸水，枪头，灭菌再用，可能你的加样有问题吧！ DNA没问题，下游试验就考虑引物，酶，dNTPS等

支持你
5楼2010-09-23 17:15:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小豆豆

金虫 (小有名气)
楼上分析的有道理，呵呵
赞一下 回复此楼
6楼2010-09-23 20:34:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rosalie161

金虫 (正式写手)
我也是最近做的，遇到了相同的问题，都优化了一个月了。最后，发现是循环太多了，可以减少到30个以内试试。
赞一下 回复此楼
Rosalei.....
7楼2010-09-24 08:43:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhtongshi

铜虫 (小有名气)

问题补充

我从新定的引物还是遇到相同的问题，如果因为没有灭菌，或DNA污染，那应该做不出来。
赞一下 回复此楼
8楼2010-09-24 08:55:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhtongshi

铜虫 (小有名气)

问题补充

PCR体系没问题，要么是引物要么是总
DNA，各位大侠帮忙分析一下这两项
赞一下 回复此楼
9楼2010-09-24 09:31:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

asdfghjkl-00

新虫 (初入文坛)
如果引物跟第一次成功时用的引物是一样的，引物就应该没问题，可能是总DNA的问题，时间长了，或者反复冻融可能会对DNA造成损伤
我是这么想的，仅供参考，我也是刚开始接触这方面
赞一下 回复此楼
10楼2010-09-24 10:54:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhtongshi 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 8/400 2026-08-25 05:12 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 明天应该可查了！？ +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-24 21:59 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] 我面上完蛋了 +9 且听虎啸 2026-08-20 10/500 2026-08-24 20:08 by 苦寒来香
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 科研孤儿太难了 +18 我4大白菜 2026-08-20 19/950 2026-08-24 09:47 by 凯恩广盛催化分�
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭