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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zhtongshi

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR求助

pcr实验
    做总DNA的PCR时,第一次能成功的做出来,而且做得非常好,但接下来再怎么做都失败。非常着急,请高人指点!
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zhtongshi

铜虫 (小有名气)

问题补充

PCR体系没问题,要么是引物要么是总
DNA,各位大侠帮忙分析一下这两项
9楼2010-09-24 09:31:22
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qiangfeng

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+5):欢迎分享经验! 2010-09-23 19:02:22
zhtongshi(金币+1): 2010-09-28 09:26:24
我认为原因主要有两个:
1. 你第一次成功可能是总DNA提取后就立即做PCR,这时总DNA是完整的,
总DNA放一段时间后,总DNA已降解或受到损伤,使目的基因无法获得
2. 可能是你做PCR时用到的试剂出问题了,可以换用新试剂试试
另外,再问一下,你是用什么试剂提取的总DNA?
PCR时,都用的哪些公司的试剂?
顺势而行,问心无愧!
2楼2010-09-23 10:31:09
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

提取DNA后最好在4度放置,以避免反复冻融引起DNA降解。
3楼2010-09-23 13:44:11
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cxb-abc

银虫 (小有名气)

zhtongshi(金币+1): 2010-09-28 09:26:34
所双蒸水,枪头,灭菌再用,可能你的加样有问题吧! DNA没问题,下游试验就考虑引物,酶,dNTPS等
4楼2010-09-23 16:49:40
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