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las_vip086

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物测序问题 已有5人参与

引物用的27F/1492R退火温度分别采用55和58度,电泳跑出来条带都很好,亮度也差不多,不知道拿55还是58度的PCR产物好呢,谢谢!
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las_vip086

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by fykxy_206 at 2010-08-03 13:57:26:
样品DNA为环境复杂样品?你是想知道环境中的微生物种类吗?
你又不想做T克隆筛选,想让公司帮你做是吗?
那还是用55度吧,一般鉴定细菌的时候都是55度。一般温度越高,特异性越好,P不出来的可能越大。

是的,是让公司做,55和58度都可以P出来的,电泳的条带都是一条,都在1500bp左右,结果都很好的。
谢谢你!
8楼2010-08-03 14:03:31
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shuiyue2728

新虫 (正式写手)

las_vip086(金币+1): 2010-08-03 13:28:03
建议割胶回收,连到T载体上,电专涂板,摇菌提质粒,质粒测序
2楼2010-08-03 13:09:17
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las_vip086

木虫 (小有名气)

我是想做克隆文库,样品DNA为环境复杂样品,个人打算直接把PCR产物交给测序公司让他们纯化后铺板挑选100个克隆进行测序。
后续我不想自己再麻烦了,像我这样是送55度产物还是58度PCR产物好呢?谢谢!
3楼2010-08-03 13:31:17
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njauzx

金虫 (小有名气)

弱弱问一下,那两个引物是什么原理?
4楼2010-08-03 13:38:23
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