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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » QPCR溶解曲线问题
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急躁的小脾气

新虫 (初入文坛)

[求助] QPCR溶解曲线问题

求助大神。。。
开始我用普通PCR跑了这对引物，也跑了胶，结果还蛮好的，没有引物二聚体和非特异性，产物长度也是对的，283bp。
但是用QPCR做了之后，大多数溶解曲线出现双峰，还有的峰的位置都变了。
求大神赐教，我这种情况是样本被污染了吗？

QPCR溶解曲线问题
AC07F37566F8953944E91A807B6F2A8D.jpg@biostar2009
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1楼 2017-04-10 15:29:23
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急躁的小脾气

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by niil at 2017-04-11 06:41:09
你这个杂峰的位置可能是引物二聚体，你的实时定量pcr程序如何？你用的引物的退火温度是多少？

退火温度是54℃，程序是：95℃预变性3min，变性10s，54度10s，72℃15s，40个循环，65℃（0:05），升温到95℃
样本不同，产生引物二聚体的情况不同，总共有24个样本，只有几条是没有出现引物二聚体的。
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8楼2017-04-11 08:45:06
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idealgas

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-12 22:13:11
确切说qPCR条件跟普通pcr条件不一样，检测精度也不一样，经验告诉我用普通pcr检测q的不能说明什么问题。另外电泳的检测灵敏度也可能看不到非特异性扩增产生的条带，而

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2楼2017-04-10 16:46:38
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深海看星

新虫 (初入文坛)
有的时候普通p跑出来的qpcr也不一定能跑出来。普通p只是大概看下引物特异性。

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3楼2017-04-10 16:53:36
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急躁的小脾气

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by idealgas at 2017-04-10 16:46:38
确切说qPCR条件跟普通pcr条件不一样，检测精度也不一样，经验告诉我用普通pcr检测q的不能说明什么问题。另外电泳的检测灵敏度也可能看不到非特异性扩增产生的条带，而
...

那我的结果里有些溶解曲线是可取的，这几条能用吗？

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4楼2017-04-10 21:51:40
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