应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于溶解曲线-RT-qPCR熔解曲线标准质粒和样品的峰值Tm值不同
191/2返回列表12下一页
查看: 10115  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

不负青春7

新虫 (小有名气)

[交流] 关于溶解曲线-RT-qPCR熔解曲线标准质粒和样品的峰值Tm值不同 已有4人参与

如图，前面的峰是标准质粒的，后边的峰是我的土壤样品的，两个峰相距太远了。标准质粒的峰应该是没什么问题的，和别人的横坐标值差不多，就是不知道样品为什么会是这样。另外，标准质粒是我自己PCR后，胶回收，连接转化等步骤后做的。请问前辈们大神们，这是为什么啊？这样做出来的数据能用吗？

关于溶解曲线-RT-qPCR熔解曲线标准质粒和样品的峰值Tm值不同
溶解曲线.gif
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-01-31 03:54:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

街角是沉默

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主你好，不知道你现在还可不可以看到这个问题了，我现在在做定量出现了类似情况，就是标曲和样品的融解曲线Tm值相差了2℃，不知道结果是否可用，你搞明白了没

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
18楼2017-03-11 16:37:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lifechuteng

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不负青春7: 金币+2 2016-02-18 12:53:50
跑个电泳，看看样品的条带跟质粒的条带是否一样大小~
赞一下 回复此楼
2楼2016-02-01 12:11:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

懒蛋

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不负青春7: 金币+3 2016-02-18 13:07:08
样品是土壤中提得metagenome？若是，这个reasonable。你的standard可以用土壤做的。
赞一下 回复此楼
向钱看，向厚赚
3楼2016-02-02 05:08:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不负青春7

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-02-01 12:11:40
跑个电泳，看看样品的条带跟质粒的条带是否一样大小~

放假回家了，没有及时看帖，很抱歉。谢谢您的回复。我跑了电泳的，见下图，条带不是很清晰，前几条带是质粒的，后几条是样品的。大体上看起来是差不多大小。
赞一下 回复此楼
4楼2016-02-18 13:06:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不负青春7

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 懒蛋 at 2016-02-02 05:08:20
样品是土壤中提得metagenome？若是，这个reasonable。你的standard可以用土壤做的。

宏基因组我不太懂是什么，因为我主要学化学。我的质粒是在土壤样品中提的。但是standard和样品的Temperature相差很大，我看别人说Tm相差要在1以下，但是我的远超过1了，这个数据可以用吗？会不会不是同一种东西啊？
赞一下 回复此楼
5楼2016-02-18 13:11:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifechuteng

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-19 22:56:22
引用回帖:
4楼: Originally posted by 不负青春7 at 2016-02-18 13:06:01
放假回家了，没有及时看帖，很抱歉。谢谢您的回复。我跑了电泳的，见下图，条带不是很清晰，前几条带是质粒的，后几条是样品的。大体上看起来是差不多大小。...

额……我看不到图……就您的熔解曲线看，您的条带是单一的，不过跟标准品的有所差距，qPCR的核心就是扩增条带一定要是您的目的基因的，如果条带大小看不出差异，终极方法是将您样品的条带测序，看看是否是您需要检测的基因，如果是，就算熔解曲线大小不同也无所谓的。
赞一下 回复此楼
6楼2016-02-19 08:52:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifechuteng

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 不负青春7 at 2016-02-18 13:11:16
宏基因组我不太懂是什么，因为我主要学化学。我的质粒是在土壤样品中提的。但是standard和样品的Temperature相差很大，我看别人说Tm相差要在1以下，但是我的远超过1了，这个数据可以用吗？会不会不是同一种东西啊？...

宏基因组就是您提取的土壤中所有微生物基因组的总和，是个混合物而不是单一的某个微生物的基因组。
另外推荐一个网址给你：https://www.dna.utah.edu/umelt/um.php
这个网页中可以预测您的熔解曲线，看看是否跟您的一致~
赞一下 回复此楼
7楼2016-02-19 08:55:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不负青春7

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-02-19 08:52:22
额……我看不到图……就您的熔解曲线看，您的条带是单一的，不过跟标准品的有所差距，qPCR的核心就是扩增条带一定要是您的目的基因的，如果条带大小看不出差异，终极方法是将您样品的条带测序，看看是否是您需要检 ...

图我没能传上。今天又跑了次胶，条带大小看不出差异。我再问您下，测序的话麻烦吗？将条带上胶回收后，再怎样做呢？
赞一下 回复此楼
8楼2016-02-19 12:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifechuteng

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 不负青春7 at 2016-02-19 12:29:27
图我没能传上。今天又跑了次胶，条带大小看不出差异。我再问您下，测序的话麻烦吗？将条带上胶回收后，再怎样做呢？...

很简单，直接送给生物公司测就可以了，给他们点引物用来测序。
一两天就可以测好，到时候比对一下序列看看是不是你的目的基因。
赞一下 回复此楼
9楼2016-02-19 12:48:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不负青春7

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-02-19 12:48:50
很简单，直接送给生物公司测就可以了，给他们点引物用来测序。
一两天就可以测好，到时候比对一下序列看看是不是你的目的基因。...

拿去测序的样品是什么样的样品？是RT-PCR的产物，还是胶回收后产物？
赞一下 回复此楼
10楼2016-02-19 13:04:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 不负青春7 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +4 gdd2018 2026-08-28 9/450 2026-08-28 14:22 by jklily
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +3 bud_bud 2026-08-27 6/300 2026-08-28 11:53 by bud_bud
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +10 Kittylucky 2026-08-27 11/550 2026-08-28 10:45 by Kittylucky
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭