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不负青春7

新虫 (小有名气)

[交流] 关于溶解曲线-RT-qPCR熔解曲线标准质粒和样品的峰值Tm值不同 已有4人参与

如图,前面的峰是标准质粒的,后边的峰是我的土壤样品的,两个峰相距太远了。标准质粒的峰应该是没什么问题的,和别人的横坐标值差不多,就是不知道样品为什么会是这样。另外,标准质粒是我自己PCR后,胶回收,连接转化等步骤后做的。请问前辈们大神们,这是为什么啊?这样做出来的数据能用吗?

关于溶解曲线-RT-qPCR熔解曲线标准质粒和样品的峰值Tm值不同
溶解曲线.gif
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-19 22:56:22
引用回帖:
4楼: Originally posted by 不负青春7 at 2016-02-18 13:06:01
放假回家了,没有及时看帖,很抱歉。谢谢您的回复。我跑了电泳的,见下图,条带不是很清晰,前几条带是质粒的,后几条是样品的。大体上看起来是差不多大小。...

额……我看不到图……就您的熔解曲线看,您的条带是单一的,不过跟标准品的有所差距,qPCR的核心就是扩增条带一定要是您的目的基因的,如果条带大小看不出差异,终极方法是将您样品的条带测序,看看是否是您需要检测的基因,如果是,就算熔解曲线大小不同也无所谓的。
6楼2016-02-19 08:52:22
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不负青春7: 金币+2 2016-02-18 12:53:50
跑个电泳,看看样品的条带跟质粒的条带是否一样大小~
2楼2016-02-01 12:11:40
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懒蛋

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不负青春7: 金币+3 2016-02-18 13:07:08
样品是土壤中提得metagenome?若是,这个reasonable。你的standard可以用土壤做的。
向钱看,向厚赚
3楼2016-02-02 05:08:20
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不负青春7

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-02-01 12:11:40
跑个电泳,看看样品的条带跟质粒的条带是否一样大小~

放假回家了,没有及时看帖,很抱歉。谢谢您的回复。我跑了电泳的,见下图,条带不是很清晰,前几条带是质粒的,后几条是样品的。大体上看起来是差不多大小。
4楼2016-02-18 13:06:01
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