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不负青春7

新虫 (小有名气)

[交流] 关于溶解曲线-RT-qPCR熔解曲线标准质粒和样品的峰值Tm值不同 已有4人参与

如图,前面的峰是标准质粒的,后边的峰是我的土壤样品的,两个峰相距太远了。标准质粒的峰应该是没什么问题的,和别人的横坐标值差不多,就是不知道样品为什么会是这样。另外,标准质粒是我自己PCR后,胶回收,连接转化等步骤后做的。请问前辈们大神们,这是为什么啊?这样做出来的数据能用吗?

关于溶解曲线-RT-qPCR熔解曲线标准质粒和样品的峰值Tm值不同
溶解曲线.gif
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不负青春7

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-02-19 12:48:50
很简单,直接送给生物公司测就可以了,给他们点引物用来测序。
一两天就可以测好,到时候比对一下序列看看是不是你的目的基因。...

拿去测序的样品是什么样的样品?是RT-PCR的产物,还是胶回收后产物?
10楼2016-02-19 13:04:12
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不负青春7: 金币+2 2016-02-18 12:53:50
跑个电泳,看看样品的条带跟质粒的条带是否一样大小~
2楼2016-02-01 12:11:40
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懒蛋

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不负青春7: 金币+3 2016-02-18 13:07:08
样品是土壤中提得metagenome?若是,这个reasonable。你的standard可以用土壤做的。
向钱看,向厚赚
3楼2016-02-02 05:08:20
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不负青春7

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-02-01 12:11:40
跑个电泳,看看样品的条带跟质粒的条带是否一样大小~

放假回家了,没有及时看帖,很抱歉。谢谢您的回复。我跑了电泳的,见下图,条带不是很清晰,前几条带是质粒的,后几条是样品的。大体上看起来是差不多大小。
4楼2016-02-18 13:06:01
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