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不负青春7

新虫 (小有名气)

[交流] 关于溶解曲线-RT-qPCR熔解曲线标准质粒和样品的峰值Tm值不同 已有4人参与

如图,前面的峰是标准质粒的,后边的峰是我的土壤样品的,两个峰相距太远了。标准质粒的峰应该是没什么问题的,和别人的横坐标值差不多,就是不知道样品为什么会是这样。另外,标准质粒是我自己PCR后,胶回收,连接转化等步骤后做的。请问前辈们大神们,这是为什么啊?这样做出来的数据能用吗?

关于溶解曲线-RT-qPCR熔解曲线标准质粒和样品的峰值Tm值不同
溶解曲线.gif
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lifechuteng

新虫 (小有名气)


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引用回帖:
5楼: Originally posted by 不负青春7 at 2016-02-18 13:11:16
宏基因组我不太懂是什么,因为我主要学化学。我的质粒是在土壤样品中提的。但是standard和样品的Temperature相差很大,我看别人说Tm相差要在1以下,但是我的远超过1了,这个数据可以用吗?会不会不是同一种东西啊?...

宏基因组就是您提取的土壤中所有微生物基因组的总和,是个混合物而不是单一的某个微生物的基因组。
另外推荐一个网址给你:https://www.dna.utah.edu/umelt/um.php
这个网页中可以预测您的熔解曲线,看看是否跟您的一致~
7楼2016-02-19 08:55:37
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
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不负青春7: 金币+2 2016-02-18 12:53:50
跑个电泳,看看样品的条带跟质粒的条带是否一样大小~
2楼2016-02-01 12:11:40
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懒蛋

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不负青春7: 金币+3 2016-02-18 13:07:08
样品是土壤中提得metagenome?若是,这个reasonable。你的standard可以用土壤做的。
向钱看,向厚赚
3楼2016-02-02 05:08:20
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不负青春7

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-02-01 12:11:40
跑个电泳,看看样品的条带跟质粒的条带是否一样大小~

放假回家了,没有及时看帖,很抱歉。谢谢您的回复。我跑了电泳的,见下图,条带不是很清晰,前几条带是质粒的,后几条是样品的。大体上看起来是差不多大小。
4楼2016-02-18 13:06:01
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