应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于溶解曲线-RT-qPCR熔解曲线标准质粒和样品的峰值Tm值不同
192/2返回列表上一页12
查看: 10198  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

不负青春7

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-02-19 08:55:37
宏基因组就是您提取的土壤中所有微生物基因组的总和，是个混合物而不是单一的某个微生物的基因组。
另外推荐一个网址给你：https://www.dna.utah.edu/umelt/um.php
这个网页中可以预测您的熔解曲线，看看是否跟您 ...

我试了下，还是看不懂，是要样品的溶解曲线跟预测的一致吗？您能帮我看下吗？CCCTCGGGAAAGCCTTCTTCACCAAATGCTGTAACGTCATCTCTTTGCACGATACGACCTCTCTTACCTTTAACATAGTAGAAAGCGGTGCAATAGACTTTGCCTAGGTACCACCAAACAACAAACATCAGCATCGATACGAACGCTGAGAAGAATGCTGCAATTACCGTTGTATGACCACCGAACGTACGCAGTGAGCCTTGTTCGATTAAGCGAACATATTCAGGAGTACCTGTACGTACATACATGTGTCCCATATAGTCAGCCATCGATAACAATGTGCCTTCAACTACGATTGGCAAGTGGGTCGGTCCAAAAATAACCCAGTTACCTGGATAGAAGAATAATCCAAAGAATCCGCCACCAATTAACGCTGTCACGAGCCAGTTACGGGTTAGATATAAAGTAATATCCAACATTAACGCACCTGGAATCATGATTGATGGAATTACAAAGTTAATTGGATAGTGTGACCACCAGTAGAAACCCCA
赞一下 回复此楼
11楼2016-02-19 13:11:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifechuteng

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 不负青春7 at 2016-02-19 13:04:12
拿去测序的样品是什么样的样品？是RT-PCR的产物，还是胶回收后产物？...

荧光定量PCR之后，跑电泳回收条带，之后送测序
赞一下 回复此楼
12楼2016-02-19 13:16:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifechuteng

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by 不负青春7 at 2016-02-19 13:11:23
我试了下，还是看不懂，是要样品的溶解曲线跟预测的一致吗？您能帮我看下吗？CCCTCGGGAAAGCCTTCTTCACCAAATGCTGTAACGTCATCTCTTTGCACGATACGACCTCTCTTACCTTTAACATAGTAGAAAGCGGTGCAATAGACTTTGCCTAGGTACCACCAAACAACAAAC ...

我预测出来大概为89℃，这个跟PCR体系中的离子浓度也有关的，所以只是个预测值，跟你实际情况下的差不多……
另外，你荧光定量PCR的产物长度有点长啊，都491bp了，一般200bp左右就可以了。
反过来倒是您的标准质粒的Tm值太低，确定扩增的条带是一样的吗？
赞一下 回复此楼
13楼2016-02-19 13:21:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不负青春7

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-02-19 13:21:01
我预测出来大概为89℃，这个跟PCR体系中的离子浓度也有关的，所以只是个预测值，跟你实际情况下的差不多……
另外，你荧光定量PCR的产物长度有点长啊，都491bp了，一般200bp左右就可以了。
反过来倒是您的标准质 ...

做的氨氧化细菌（AOB）,我看文献里大都用这个491bp的，所以我也用的这个。很奇怪，我给的这个序列就是在做标准品的过程中测的，也就是说标准品应该就是这个序列。我将胶回收后的样品拿去测序了，不知道能不能测出来，明天晚上会出结果。
赞一下 回复此楼
14楼2016-02-19 19:02:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不负青春7

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-02-19 13:21:01
我预测出来大概为89℃，这个跟PCR体系中的离子浓度也有关的，所以只是个预测值，跟你实际情况下的差不多……
另外，你荧光定量PCR的产物长度有点长啊，都491bp了，一般200bp左右就可以了。
反过来倒是您的标准质 ...

测序结果是这样的，什么结合、结构，不搞生物的人完全不懂在说什么。用测出来的序列，blast了一下，也不是很会看。打算放弃了，这个基因的数据先不用了。谢谢您一直以来的耐心解答。
关于溶解曲线-RT-qPCR熔解曲线标准质粒和样品的峰值Tm值不同
QQ截图20160220172956.png


关于溶解曲线-RT-qPCR熔解曲线标准质粒和样品的峰值Tm值不同-1
blast-标.png


关于溶解曲线-RT-qPCR熔解曲线标准质粒和样品的峰值Tm值不同-2
blast-CK.png
赞一下 回复此楼
15楼2016-02-20 19:36:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangyafang

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
15楼: Originally posted by 不负青春7 at 2016-02-20 19:36:13
测序结果是这样的，什么结合、结构，不搞生物的人完全不懂在说什么。用测出来的序列，blast了一下，也不是很会看。打算放弃了，这个基因的数据先不用了。谢谢您一直以来的耐心解答。

QQ截图20160220172956.png

b ...

你好，你是定量PCR的产物直接纯化回收后测序的吗，荧光信号会影响测序吗
赞一下 回复此楼
16楼2016-05-30 00:43:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不负青春7

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by tangyafang at 2016-05-30 00:43:14
你好，你是定量PCR的产物直接纯化回收后测序的吗，荧光信号会影响测序吗...

好久没登录了，没看到您回复，不好意思。我当时是直接拿PCR的产物去测序的，好像也没有做纯化回收。时间有点久，有些忘记了。你问的荧光信号会不会影响测序，我也不太清楚。
赞一下 回复此楼
17楼2016-07-07 12:44:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

街角是沉默

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主你好，不知道你现在还可不可以看到这个问题了，我现在在做定量出现了类似情况，就是标曲和样品的融解曲线Tm值相差了2℃，不知道结果是否可用，你搞明白了没

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
18楼2017-03-11 16:37:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxy20052002

木虫 (著名写手)
我也想知道为什么
赞一下 回复此楼
19楼2017-06-08 15:20:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 不负青春7 的主题更新
192/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 WqtG0Aem8Ufl 2026-10-24 4/200 2026-10-26 03:04 by cLOojpOxkX0G
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 WqtG0Aem8Ufl 2026-10-24 5/250 2026-10-26 02:51 by cLOojpOxkX0G
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 3xN9SualEUPt 2026-10-24 6/300 2026-10-26 02:42 by cLOojpOxkX0G
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3xN9SualEUPt 2026-10-24 5/250 2026-10-26 02:38 by cLOojpOxkX0G
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 3xN9SualEUPt 2026-10-24 5/250 2026-10-26 02:25 by cLOojpOxkX0G
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 3xN9SualEUPt 2026-10-24 5/250 2026-10-26 02:12 by cLOojpOxkX0G
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 3xN9SualEUPt 2026-10-24 5/250 2026-10-26 02:05 by cLOojpOxkX0G
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 3xN9SualEUPt 2026-10-24 4/200 2026-10-26 02:03 by cLOojpOxkX0G
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 3xN9SualEUPt 2026-10-24 5/250 2026-10-26 01:59 by cLOojpOxkX0G
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 DI1qFHFK0KbE 2026-10-24 5/250 2026-10-26 01:33 by cLOojpOxkX0G
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 7xHjyB3bAiwg 2026-10-23 12/600 2026-10-26 00:54 by cLOojpOxkX0G
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 7xHjyB3bAiwg 2026-10-23 11/550 2026-10-26 00:47 by cLOojpOxkX0G
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 7xHjyB3bAiwg 2026-10-23 5/250 2026-10-26 00:32 by cLOojpOxkX0G
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 GVGRDgNfv7P4 2026-10-23 10/500 2026-10-26 00:15 by cLOojpOxkX0G
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 GVGRDgNfv7P4 2026-10-23 5/250 2026-10-26 00:08 by cLOojpOxkX0G
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 7xHjyB3bAiwg 2026-10-23 8/400 2026-10-25 12:59 by XiYP04It3Evb
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 7xHjyB3bAiwg 2026-10-23 10/500 2026-10-25 12:51 by XiYP04It3Evb
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 7xHjyB3bAiwg 2026-10-23 11/550 2026-10-24 23:35 by XcOYG53d3x4p
[文学芳草园] 亲密关系 +7 宋昙 2026-10-21 13/650 2026-10-23 17:07 by 小牧11
[考博] 郑州大学申博 +5 stars~ 2026-10-19 8/400 2026-10-22 15:06 by stars~
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭