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upgo123

金虫 (小有名气)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 1038.4
散金: 605
红花: 4
帖子: 222
在线: 51.3小时
虫号: 2250006
注册: 2013-01-19
性别: GG
专业: 教育学

[求助] 荧光定量qPCR内参基因的CT问题及熔解曲线已有1人参与

大家好，小弟最近做荧光定量PCR，相对定量，SYBR GREEN I，发现两个问题：
1，内参基因的CT值为24，大于目的基因的CT值20，结果能用吗？为什么？
2，有一个目的基因（不是上述目的基因）的溶解温度为93℃，结果能用吗？为什么？
网大侠不吝赐教，谢谢！

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选择，然后坚持

1楼 2015-12-07 20:20:48

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

苯苯兔

银虫 (初入文坛)

应助: 8 (幼儿园)
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专业: 免疫生物学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
upgo123: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢，我已经做了，可是93℃那个平行性不理想 2015-12-10 11:06:04

1、结果可用，并没有关系。
2、这样看来你这条目的基因片段很长或者说GC含量高，这其实都是要避免的（可能潜在增加二级结构的复杂i性），而且这个温度接近做溶解曲线的最高温（95度），建议避免使用。

2楼2015-12-09 18:32:13

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