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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » qpcr溶解曲线问题
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新虫 (初入文坛)

[求助] qpcr溶解曲线问题 已有1人参与

我把cDNA模板2倍稀释，做了五个浓度梯度，然后用合成的基因引物做qpcr。用的是SYBR试剂盒。
得到的CT值不是应该 浓度增加一个数量级，CT值增加1吗？比如浓度是1、2、4、8、16倍，CT值应该是20、21、22、23、24.我用Actin做的时候是符合这个规律的，而到我自己做的基因的时候，得到的CT值一直是相近的几个数，都是26左右。什么原因呢？
  还有就是扩增效率怎么测？我做相对定量需要做这个吗？
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  • 附件 1 : gyf,_SYBR_Green,_01-23-2015,_14Hr_08Min.mxp
    • 2015-01-26 15:22:16, 142.4 K

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1楼 2015-01-26 15:31:17
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看了一下你的程序，建议你把Thermal Profile 改下，改成
1 Plateau
2 normal 2 step
3 Dissociation/Melt
赞一下 回复此楼
人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2015-01-26 17:28:07
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