应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切，EcoR1和Not1，切T载体
141/2返回列表12下一页
查看: 5132  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

万法唯心

新虫 (小有名气)

[交流] 双酶切，EcoR1和Not1，切T载体 已有9人参与

37度，切24小时没有切开或者是弥散了，用的是EcoR1的buffer，30ul体系，质粒10，水13，buffer3，两个酶各2，体系有问题吗？还是条件不好？

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-01-08 17:05:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

我是淡淡老师

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
内容已删除
赞一下(4人) 回复此楼
5楼2016-01-10 12:09:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

反应链

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
NotI endonuclease works in single digestion? It is CpG Methylation sensitive.

According to Takara Products Catolog, double digestion with EcoRI and NotI should be supplied with BSA.
双酶切，EcoR1和Not1，切T载体
pMD18-T.jpg
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2016-01-08 20:03:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangshengyan

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
use EcoRI-HF and NotI-HF; NEB Cut smart buffer 2 hours digestion is enough
赞一下(1人) 回复此楼
ANNA&KEVIN
3楼2016-01-09 11:38:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

万法唯心

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiangshengyan at 2016-01-09 11:38:07
use EcoRI-HF and NotI-HF; NEB Cut smart buffer 2 hours digestion is enough

没有呀，我们只有thermo scientific的酶，请问我条件应该怎么改

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-01-09 12:22:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

632362481

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
先测量一下提取的质粒浓度，浓度太高，量太大可能酶切不彻底，另外如果是快酶的话，就按照说明书来操作，酶切时间稍微长一点就好，除非有的酶显示不会出现星活性。
赞一下 回复此楼
。。。
6楼2016-01-10 14:20:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原海亮

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先，楼主先要确定质粒有没有问题，比如浓度如何，是否提取到。然后酶切的话时间太长，之前用慢酶的时候也只是五六小时吧，现在快酶半小时左右

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
天空才是极限，我有信心飞的更高！
7楼2016-01-10 23:17:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biocherry

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
buffer  确定用对了？质粒酶切量太多？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-01-10 23:42:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

万法唯心

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by biocherry at 2016-01-10 23:42:56
buffer  确定用对了？质粒酶切量太多？

就是用的EcoR1的buffer，应该没问题的，质粒加的10ul，今天又跑了一下，还是上面的体系，跑5个小时，结果完全没有条带，什么原因被降解了呢

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-01-10 23:48:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

基因操作工

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
质粒浓度不明确。酶的品牌类型不明确。
赞一下 回复此楼
10楼2016-01-11 11:11:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 万法唯心 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-09-02 00:19 by xiangy672
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭