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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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万法唯心

新虫 (小有名气)

[交流] 双酶切,EcoR1和Not1,切T载体 已有9人参与

37度,切24小时没有切开或者是弥散了,用的是EcoR1的buffer,30ul体系,质粒10,水13,buffer3,两个酶各2,体系有问题吗?还是条件不好?

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万法唯心

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiangshengyan at 2016-01-09 11:38:07
use EcoRI-HF and NotI-HF; NEB Cut smart buffer 2 hours digestion is enough

没有呀,我们只有thermo scientific的酶,请问我条件应该怎么改

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4楼2016-01-09 12:22:35
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反应链

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
NotI endonuclease works in single digestion? It is CpG Methylation sensitive.

According to Takara Products Catolog, double digestion with EcoRI and NotI should be supplied with BSA.
双酶切,EcoR1和Not1,切T载体
pMD18-T.jpg

2楼2016-01-08 20:03:01
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xiangshengyan

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
use EcoRI-HF and NotI-HF; NEB Cut smart buffer 2 hours digestion is enough
ANNA&KEVIN
3楼2016-01-09 11:38:07
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632362481

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
先测量一下提取的质粒浓度,浓度太高,量太大可能酶切不彻底,另外如果是快酶的话,就按照说明书来操作,酶切时间稍微长一点就好,除非有的酶显示不会出现星活性。
。。。
6楼2016-01-10 14:20:07
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