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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 帮忙分析下双酶切，是不是被切碎了？
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sars37

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] 帮忙分析下双酶切，是不是被切碎了？

Hind iii和 ECOR I  双酶切，质粒是5500ug/ul，所以稀释了3倍后用2ul的酶，取1ul酶切4小时，PCDNA800ug/ul，取2ul用2ul的酶酶切，都是40ul体系，酶切后图如下，现在费解的是，都是酶切了2ug左右的DNA，为什么两个亮度不一样呢，而且PCDNA的条带虽然亮，但是很碎，是不是被切碎了？
帮忙分析下双酶切，是不是被切碎了？
Administrator 2013-08-29 23hr 22min.jpg
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1楼 2013-09-01 15:38:32
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九九1988

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-09-01 18:16:14
sars37: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-09-02 13:39:04
Marker的大小使用的不合适，起码要能看出最上面的条带是多大的，建议使用15000bp的。酶切后要有未进行酶切的质粒在同一块胶上做对照。从你的结果来看不出最上面的质粒的大小。
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2楼2013-09-01 17:33:36
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sars37: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-09-02 13:39:09
1. 首先，肯定是没有切碎的，不然会很弥散的，而不会有这么锐利的条带；
2. 浓度问题，你可以把酶切之前的样品上样试试，如果你是通过od 来测定浓度的，方法本身的影响因素就很多，浓度可能不准；
3. 建议继续后面实验，不必纠结在这里；
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
3楼2013-09-01 22:20:18
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