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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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sars37

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] 帮忙分析下双酶切,是不是被切碎了?

Hind iii和 ECOR I  双酶切,质粒是5500ug/ul,所以稀释了3倍后用2ul的酶,取1ul酶切4小时,PCDNA800ug/ul,取2ul用2ul的酶酶切,都是40ul体系,酶切后图如下,现在费解的是,都是酶切了2ug左右的DNA,为什么两个亮度不一样呢,而且PCDNA的条带虽然亮,但是很碎,是不是被切碎了?
帮忙分析下双酶切,是不是被切碎了?
Administrator 2013-08-29 23hr 22min.jpg
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九九1988

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-09-01 18:16:14
sars37: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-09-02 13:39:04
Marker的大小使用的不合适,起码要能看出最上面的条带是多大的,建议使用15000bp的。酶切后要有未进行酶切的质粒在同一块胶上做对照。从你的结果来看不出最上面的质粒的大小。
2楼2013-09-01 17:33:36
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sars37: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-09-02 13:39:09
1. 首先,肯定是没有切碎的,不然会很弥散的,而不会有这么锐利的条带;
2. 浓度问题,你可以把酶切之前的样品上样试试,如果你是通过od 来测定浓度的,方法本身的影响因素就很多,浓度可能不准;
3. 建议继续后面实验,不必纠结在这里;
科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
3楼2013-09-01 22:20:18
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