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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切实验
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Cllair

金虫 (小有名气)

[求助] 双酶切实验

我用的酶切位点是EcoR1和 Not1，问题是我的EcoR1是takara家的，Not1是fermentas家的，他们的体系不太一样，EcoR1用的是10x H buffer，Not1用的是10x buffer O，
哪位大侠能指点一下，双酶切实验，这两个试剂能一块用不呢。这两个buffer应该是不是只是标示方法不同呢，求解中。。。
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有今生没来世，且行且珍惜。
1楼 2012-12-12 16:43:04
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hourl11

禁虫 (初入文坛)
★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 鼓励 2012-12-12 17:54:09
本帖内容被屏蔽
2楼2012-12-12 17:34:47
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木风弓玄

铁虫 (初入文坛)
楼上正解 公司不同 buffer不同用
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学海无涯
3楼2012-12-12 20:02:00
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fuyin

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以先做一个酶切，然后进行胶回收，在做另外一个酶切。
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4楼2012-12-12 20:05:41
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useless

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以选择任意一个公司的双酶切体系同时进行双酶切。
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5楼2012-12-12 22:12:36
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般来说，你可以查找takara或fermentas公司的双酶切buffer兼容性方面的信息，只要任何一个公司有兼容的buffer，你就可以用于你的双酶切（即使两种酶来自不同的公司）。
如果为了方便，你可以用doulbe digestion designer进行双酶切设计，这个软件不仅可以精确计算双酶切时各种酶的用量（确保完全酶切），而且可以推荐合适的双酶切buffer。该软件中一个很好用的功能，就是专门用于设计两种酶来自不同供应商时的双酶切，可以自动推荐双酶切buffer.我用此软件帮你设计了一下，你可以考虑用MBI的fast digestion buffer或者takara公司的1*buffer H+BSA+TritonX100。该软件是在线软件，可以免费试用，具体链接如下：http://www.bioinfomatics.cn/enzyme/login.php
祝好运
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Cllair
6楼2012-12-12 22:30:32
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westerli

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般先用takara的切一下试试。
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7楼2012-12-13 07:43:42
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shsDerek

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Fd不是有一种通用buf吗，直接用用10*Fdbuf就可以，我就是这样做的
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8楼2012-12-13 08:30:32
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在catalog上查一下两个酶在各种不同buffer里的活性，只要有一种buffer两种酶的活性都是100%的话就直接用那个buffer切。
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9楼2012-12-13 08:35:48
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ypan

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不是同一个厂家的内切酶，Buffer很难兼容，还有可能会产生星活性。还是选用一家公司的酶和Buffer用。
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10楼2012-12-13 09:02:49
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