| 查看: 2648 | 回复: 13 | |||
[求助]
载体质粒的双酶切 已有3人参与
|
|||
|
我做的是Pcu19质粒的双酶切，酶切体系如下：质粒10μL，10×H Buffer 4μL，ddH2O2 22μL ，SaL I 2μL，EcoRI 2μL。另一管质粒的量为20微升恩，其中水的量变为12微升，其他的不变。 然后将其放入37度恒温培养箱培养3h，再在80摄氏度使酶失活，最后进行电泳检测。图片如下：从下往上看一次点的是：Marker，对照空载体，酶切之后的两个产物。 为什么酶切之后的条带比空载体的条带大呢？？我试过好多个体系，但没有一个酶切成功，请各位虫友帮帮忙！  发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有98人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 质粒双酶切后的电泳图有些奇怪
已经有7人回复
- 质粒双酶切 多条带
已经有3人回复
- pet28a 空质粒双酶切图像问题
已经有15人回复
- 质粒的双酶切位点切不开是为什么？怎么办呢？切不开载体质粒不能实现重组。。
已经有15人回复
- 质粒ＤＮＡ双酶切，怎么切不开
已经有1人回复
- 请教——质粒双酶切问题
已经有14人回复
- 重组质粒双酶切后没有条带
已经有20人回复
- 测序通过的质粒做双酶切，切不下来什么东西
已经有0人回复
- 提取重组质粒进行双酶切之后什么条带也没有，怎么回事？？
已经有7人回复
- 空质粒双酶切后出现消失的情况
已经有9人回复
- 重组质粒单双酶切结果一样，奇怪了的……
已经有15人回复
2楼2015-11-29 17:01:02
|
图没看清，如果说切出来变得比超螺旋大的话很有可能是你的酶切是个单酶切，也就是其中一种酶没有发挥效用……如果两个酶的最适buffer不同的话，你可以两步酶切 发自小木虫Android客户端 |
5楼2015-11-30 00:14:55
吗子
金虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1200.9
- 散金: 49
- 红花: 13
- 帖子: 149
- 在线: 79小时
- 虫号: 2222309
- 注册: 2013-01-04
- 性别: GG
- 专业: 农业昆虫学
13楼2015-12-02 08:58:54
3楼2015-11-29 22:06:08
4楼2015-11-29 22:06:48
6楼2015-11-30 08:20:51
7楼2015-11-30 18:06:44
|
可是酶切之后的质粒载体比没有酶切过的质粒载体还要大没道理啊，应该是环状的比线状的大吧。还有我的目的片段是850bp的，载体是大于2000bp的，如果连接上了应该不会只比酶切的大一点点吧？ 发自小木虫Android客户端 |
8楼2015-12-01 08:28:16
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
郑凤席: 金币+2, ★★★很有帮助, 不知为啥他只能给1～2，本来我是要给9的～～ 2015-12-01 14:41:15
感谢参与，应助指数 +1
郑凤席: 金币+2, ★★★很有帮助, 不知为啥他只能给1～2，本来我是要给9的～～ 2015-12-01 14:41:15
|
1 环状质粒凝胶电泳一般会出现三种构象：超螺旋，这种迁移速度最快，也是看到最多的；接近线状的，这种构象在凝胶中与酶切后的线状DNA迁移率一致；负超螺旋，这种质粒是开环的，迁移速率最慢，在凝胶中看起来比线状DNA要大。从你的图片来看，你的质粒是被切成线状的了。 2 如果你要纠结没有检测到目的片段，那有一种可能是没有连入目的片段，他也是个空载体；另一种可能是连入目的片段，但没有切下来，这有可能是其中一个酶切位点破坏，或一个没失活；建议你将质粒分别做个单酶切，检测一下位点/酶 是否正常。 |
9楼2015-12-01 11:11:00
10楼2015-12-01 12:22:27