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郑凤席

新虫 (小有名气)

我是按照酶的总量不超过体系的1/10来加的,因为不知道哪个量最好,所以就做了很多不同酶量的,但是切的效果都一样,都没有我要的

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11楼2015-12-01 14:36:58
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郑凤席

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by zcliang2014 at 2015-12-01 11:11:00
1 环状质粒凝胶电泳一般会出现三种构象:超螺旋,这种迁移速度最快,也是看到最多的;接近线状的,这种构象在凝胶中与酶切后的线状DNA迁移率一致;负超螺旋,这种质粒是开环的,迁移速率最慢,在凝胶中看起来比线状 ...

好的,我试试,谢谢!

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12楼2015-12-01 14:39:24
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吗子

金虫 (小有名气)

质粒是环状的,酶切之后成线状,线状跑得更慢,所以在后面。双酶切理论上可以切出目的条带来,但看你的结果,更多的是单酶切产物。2ul的酶量也多了点吧。建议你减少酶量,20ul体系,1ul酶足够了,延长一下酶切时间,4-5h。
深秋
13楼2015-12-02 08:58:54
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郑凤席

新虫 (小有名气)

酶量最过最低的是0.5微升,体系是10微升的,但切出的条带也是不好的,而且条带没有酶量4微升,体系50微升的亮。我也做过五小时的,过夜的,但都没有得到我要的结果

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14楼2015-12-02 09:09:16
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