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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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郑凤席

新虫 (小有名气)

[求助] 载体质粒的双酶切 已有3人参与

我做的是Pcu19质粒的双酶切,酶切体系如下:质粒10μL,10×H Buffer 4μL,ddH2O2   22μL ,SaL I  2μL,EcoRI 2μL。另一管质粒的量为20微升恩,其中水的量变为12微升,其他的不变。
然后将其放入37度恒温培养箱培养3h,再在80摄氏度使酶失活,最后进行电泳检测。图片如下:从下往上看一次点的是:Marker,对照空载体,酶切之后的两个产物。
为什么酶切之后的条带比空载体的条带大呢??我试过好多个体系,但没有一个酶切成功,请各位虫友帮帮忙!

载体质粒的双酶切


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吗子

金虫 (小有名气)

质粒是环状的,酶切之后成线状,线状跑得更慢,所以在后面。双酶切理论上可以切出目的条带来,但看你的结果,更多的是单酶切产物。2ul的酶量也多了点吧。建议你减少酶量,20ul体系,1ul酶足够了,延长一下酶切时间,4-5h。
深秋
13楼2015-12-02 08:58:54
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匿名

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2楼2015-11-29 17:01:02
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郑凤席

新虫 (小有名气)

我的载体是大于2000的,本来是环状的,我要线性的,所以要切开,但我做了很多次改了很多次体系都切不开

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3楼2015-11-29 22:06:08
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郑凤席

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 弦山小栗 at 2015-11-29 17:01:02
你的图上的都表示什么?看酶切位点,你切下的片段是多大?要是确认没有问题的话,质粒的状态可能是两种,一种是环状的,一种是线性的,环状的跑的快,大小不能完全根据琼脂糖电泳结果判断。希望对你有帮助。
...

从下到上为Marker,对照空载体,酶切之后的两个产物。

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4楼2015-11-29 22:06:48
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