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载体质粒的双酶切 已有3人参与
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我做的是Pcu19质粒的双酶切，酶切体系如下：质粒10μL，10×H Buffer 4μL，ddH2O2 22μL ，SaL I 2μL，EcoRI 2μL。另一管质粒的量为20微升恩，其中水的量变为12微升，其他的不变。 然后将其放入37度恒温培养箱培养3h，再在80摄氏度使酶失活，最后进行电泳检测。图片如下：从下往上看一次点的是：Marker，对照空载体，酶切之后的两个产物。 为什么酶切之后的条带比空载体的条带大呢？？我试过好多个体系，但没有一个酶切成功，请各位虫友帮帮忙！  发自小木虫Android客户端 |
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3楼2015-11-29 22:06:08
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图没看清，如果说切出来变得比超螺旋大的话很有可能是你的酶切是个单酶切，也就是其中一种酶没有发挥效用……如果两个酶的最适buffer不同的话，你可以两步酶切 发自小木虫Android客户端 |
5楼2015-11-30 00:14:55