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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒双酶切后的电泳图有些奇怪
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liuwukang

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒双酶切后的电泳图有些奇怪 已有5人参与

后两个孔是质粒双酶切后的电泳结果，为什么会出现这种状况？是不是切得效果不好？如果直接割胶和片段连接，再导入感受态的时候会不会有很多空载体？

质粒双酶切后的电泳图有些奇怪
20141123_200403.jpg
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1楼 2014-11-23 21:25:42
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圆yy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-24 12:35:32
那个条带是你自己想要的吗？？？？都没有跑开
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2楼2014-11-23 22:21:33
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 圆yy at 2014-11-23 22:21:33
那个条带是你自己想要的吗？？？？都没有跑开

质粒双酶切按理说应该就是两个条带吧，分子量大的是我要的

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3楼2014-11-23 23:34:37
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yingxiaoying

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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你这是三条带吧 中间的太亮所以和上面没跑开
至于分子量 最亮的可能是没切开的质粒，环形质粒跑到哪个位置都是有可能的
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4楼2014-11-24 09:38:48
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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建议楼主将质粒稀释以后再行酶切，酶切之后跑电泳加一个泳道，跑没有酶切的质粒作对照，可以很容易判断哪个是切开的质粒，哪个是没有切开的。
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没有做不到，只有想不到！
5楼2014-11-24 11:06:28
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-24 12:35:55
酶切尽量过夜吧，保险起见
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踏实
6楼2014-11-24 11:06:52
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cckk_2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得双酶切必须掌握酶切体系的组成，在10微升体系里，除了buffer，两个酶之外，最重要的是酶切的载体量要少，你以前肯定测质粒浓度了，载体有1-2微克足够，剩下补水。这样切的载体比较干净，然后切胶回收。而目的片段双酶切的时候就要浓度多些，就是类似于过饱和的状态，防止连接的时候出现载体自连
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科研炮灰
7楼2014-11-24 15:03:21
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cckk_2000 at 2014-11-24 15:03:21
我觉得双酶切必须掌握酶切体系的组成，在10微升体系里，除了buffer，两个酶之外，最重要的是酶切的载体量要少，你以前肯定测质粒浓度了，载体有1-2微克足够，剩下补水。这样切的载体比较干净，然后切胶回收。而目的 ...

正在尝试你的建议，谢谢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2014-11-25 15:29:25
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