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liuwukang

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒双酶切后的电泳图有些奇怪 已有5人参与

后两个孔是质粒双酶切后的电泳结果,为什么会出现这种状况?是不是切得效果不好?如果直接割胶和片段连接,再导入感受态的时候会不会有很多空载体?

质粒双酶切后的电泳图有些奇怪
20141123_200403.jpg
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cckk_2000

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我觉得双酶切必须掌握酶切体系的组成,在10微升体系里,除了buffer,两个酶之外,最重要的是酶切的载体量要少,你以前肯定测质粒浓度了,载体有1-2微克足够,剩下补水。这样切的载体比较干净,然后切胶回收。而目的片段双酶切的时候就要浓度多些,就是类似于过饱和的状态,防止连接的时候出现载体自连
科研炮灰
7楼2014-11-24 15:03:21
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圆yy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-24 12:35:32
那个条带是你自己想要的吗????都没有跑开
2楼2014-11-23 22:21:33
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liuwukang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 圆yy at 2014-11-23 22:21:33
那个条带是你自己想要的吗????都没有跑开

质粒双酶切按理说应该就是两个条带吧,分子量大的是我要的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2014-11-23 23:34:37
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yingxiaoying

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-24 12:35:47
你这是三条带吧 中间的太亮所以和上面没跑开
至于分子量 最亮的可能是没切开的质粒,环形质粒跑到哪个位置都是有可能的
4楼2014-11-24 09:38:48
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