| 查看: 3002 | 回复: 13 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
载体质粒的双酶切 已有3人参与
|
|||
|
我做的是Pcu19质粒的双酶切，酶切体系如下：质粒10μL，10×H Buffer 4μL，ddH2O2 22μL ，SaL I 2μL，EcoRI 2μL。另一管质粒的量为20微升恩，其中水的量变为12微升，其他的不变。 然后将其放入37度恒温培养箱培养3h，再在80摄氏度使酶失活，最后进行电泳检测。图片如下：从下往上看一次点的是：Marker，对照空载体，酶切之后的两个产物。 为什么酶切之后的条带比空载体的条带大呢？？我试过好多个体系，但没有一个酶切成功，请各位虫友帮帮忙！  发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有134人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 质粒双酶切后的电泳图有些奇怪
已经有7人回复
- 质粒双酶切 多条带
已经有3人回复
- pet28a 空质粒双酶切图像问题
已经有15人回复
- 质粒的双酶切位点切不开是为什么？怎么办呢？切不开载体质粒不能实现重组。。
已经有15人回复
- 质粒ＤＮＡ双酶切，怎么切不开
已经有1人回复
- 请教——质粒双酶切问题
已经有14人回复
- 重组质粒双酶切后没有条带
已经有20人回复
- 测序通过的质粒做双酶切，切不下来什么东西
已经有0人回复
- 提取重组质粒进行双酶切之后什么条带也没有，怎么回事？？
已经有7人回复
- 空质粒双酶切后出现消失的情况
已经有9人回复
- 重组质粒单双酶切结果一样，奇怪了的……
已经有15人回复
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
郑凤席: 金币+2, ★★★很有帮助, 不知为啥他只能给1～2，本来我是要给9的～～ 2015-12-01 14:41:15
感谢参与，应助指数 +1
郑凤席: 金币+2, ★★★很有帮助, 不知为啥他只能给1～2，本来我是要给9的～～ 2015-12-01 14:41:15
|
1 环状质粒凝胶电泳一般会出现三种构象：超螺旋，这种迁移速度最快，也是看到最多的；接近线状的，这种构象在凝胶中与酶切后的线状DNA迁移率一致；负超螺旋，这种质粒是开环的，迁移速率最慢，在凝胶中看起来比线状DNA要大。从你的图片来看，你的质粒是被切成线状的了。 2 如果你要纠结没有检测到目的片段，那有一种可能是没有连入目的片段，他也是个空载体；另一种可能是连入目的片段，但没有切下来，这有可能是其中一个酶切位点破坏，或一个没失活；建议你将质粒分别做个单酶切，检测一下位点/酶 是否正常。 |
9楼2015-12-01 11:11:00
2楼2015-11-29 17:01:02
3楼2015-11-29 22:06:08
4楼2015-11-29 22:06:48
