应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体质粒的双酶切
51/1返回列表
查看: 2739  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

郑凤席

新虫 (小有名气)

[求助] 载体质粒的双酶切 已有3人参与

我做的是Pcu19质粒的双酶切，酶切体系如下：质粒10μL，10×H Buffer 4μL，ddH2O2   22μL ，SaL I  2μL，EcoRI 2μL。另一管质粒的量为20微升恩，其中水的量变为12微升，其他的不变。
然后将其放入37度恒温培养箱培养3h，再在80摄氏度使酶失活，最后进行电泳检测。图片如下：从下往上看一次点的是：Marker，对照空载体，酶切之后的两个产物。
为什么酶切之后的条带比空载体的条带大呢？？我试过好多个体系，但没有一个酶切成功，请各位虫友帮帮忙！

载体质粒的双酶切


发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-11-29 15:41:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyulin

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶加的太多了，0.25足够了，老板看了会心疼死，酶多不是啥好事，几十纳克的DNA几个单位足矣
赞一下 回复此楼
10楼2015-12-01 12:22:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

匿名

用户注销 (著名写手)
本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2015-11-29 17:01:02
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

郑凤席

新虫 (小有名气)
我的载体是大于2000的，本来是环状的，我要线性的，所以要切开，但我做了很多次改了很多次体系都切不开

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2015-11-29 22:06:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

郑凤席

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 弦山小栗 at 2015-11-29 17:01:02
你的图上的都表示什么？看酶切位点，你切下的片段是多大？要是确认没有问题的话，质粒的状态可能是两种，一种是环状的，一种是线性的，环状的跑的快，大小不能完全根据琼脂糖电泳结果判断。希望对你有帮助。
...

从下到上为Marker，对照空载体，酶切之后的两个产物。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2015-11-29 22:06:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[基金申请] 成果系统访问量大，请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦，已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +3 weizhong123 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:42 by 公瑾逍遥
[考研] 0805总分292，求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂； 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 化工专硕342，一志愿大连理工大学，求调剂 +3 kyf化工 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:49 by yywzz
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭