| 查看: 1676 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
寻香海棠新虫 (初入文坛)
|
[求助]
PCR就是不出目的条带！！！！ 已有1人参与
|
|
|
我想做基因敲除，准备敲除的下游臂扩出来没有问题。 但是上游臂就是扩不出来。梯度PCR和降落PCR都试了，还是不行。引物设计的是60度的退火温度，软件是Omiga2.0. 引物也重新设计过了，向上增加了100bp左右，还是没有条带 用的菌株不是植物乳杆菌标准株，参考是WCFS1 诸位帮我分析一下！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有288人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 用组织提取总RNA后逆转录得到的cDNA进行PCR一直未有目的条带，请大家帮忙！
已经有20人回复
- pcr扩增后 电泳后条带不对 请大侠帮忙!
已经有11人回复
- 有没有熟悉gateway cloning的大牛，想不通，求解释啊！
已经有7人回复
- 崩溃！！易错pcr重组质粒构建总是失败！！求大神指导！
已经有8人回复
- 求助！！使用G418筛选突变体及检测
已经有1人回复
- PCR结果图，最下边的是二聚体吗？目的条带不多
已经有9人回复
- 菌液pcr总是做不出！求高手解答！
已经有18人回复
- 融合PCR最后一步做不出来，求救！！！
已经有23人回复
- PCR扩增DNA序列无条带
已经有46人回复
- 重叠延伸第一轮验证了目的条带，转化后，第二轮总是P不出目的条带，验证不了
已经有6人回复
- RT—PCR引物、条带问题，新手求助，求意见，求建议！
已经有9人回复
- 转化后菌液PCR鉴定，没有目的条带
已经有15人回复
- PCR不出带，求教
已经有14人回复
- 寻找好心人，帮帮我，关于引物以及PCR的问题！
已经有7人回复
- RT-PCR弥散带问题
已经有11人回复
- 流感病毒RT-PCR，电泳老是跑不出条带~~~纠结！
已经有5人回复
- 崩溃啊！！！关于转化
已经有4人回复
- PCR后凝胶电泳条带时有时无是怎么回事？
已经有5人回复
- 【专题】PCR实验技术指南
已经有535人回复
9楼2015-09-26 22:38:03
wxb2061
银虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 283
- 散金: 60
- 帖子: 135
- 在线: 23.2小时
- 虫号: 2901790
- 注册: 2013-12-29
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2015-09-25 23:20:19
寻香海棠
新虫 (初入文坛)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 711.5
- 散金: 10
- 帖子: 49
- 在线: 13.8小时
- 虫号: 3265268
- 注册: 2014-06-09
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2015-09-25 23:25:52
199006287956
木虫 (著名写手)
- 应助: 44 (小学生)
- 金币: 1662
- 散金: 1884
- 红花: 16
- 帖子: 1430
- 在线: 207.6小时
- 虫号: 2344563
- 注册: 2013-03-13
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
|
这个问题，我遇到过，我选择的第一个方案往往是设计温度梯度进行扩增，48-68度均试过，大部分能出来。但是还是有顽强的，如果结合引物的目的基因位置，自身不是很好和引物结合，判断结合好坏有G值决定的，不能偏低。会导致没有扩增条带，我们往往就是往外或者往里，从新设计引物。往往能批出条带。多设几个不同结合位点的引物，不差钱。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2015-09-26 00:28:43
