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崩溃啊！！！关于转化
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使用Ferments公司的NotI,NocI内切酶 双酶切pET22b及目的基因（37度，3小时），T4连接酶连接过夜，化学转化E.coli Bl21或JM109或DH5a，涂布SOB培养基，就出现以下情况： 1 ：携带目的基因的菌不长，而阳性对照长的很好 2：这样做几次后，尝试使用JM109，结果。。。阳性对照和目的克隆都不长，抓狂ing 3：好不容易长了几个克隆，挑取后于含Amp的LB培养基中，就是不长，无语问苍天 一气之下，改用电转，结果 克隆确实长出来，挑取的菌落也在含Amp的LB培养基中生长良好，菌液PCR也能观察到目的条带 但是，但是！！！送去测序，竟然又出现这样的情况 1· 提不出质粒 2 即使提出质粒，T7启动子测序无信号！！ 3 刚刚好不容易有一个样品有信号，将之通过BLastX与原来的序列 比对，竟然发现没有相似性！！！！ 苍天啊，大地啊！！ 测序都做了快2个月了，就这么简单的转化，做了一个学期了！！！！！！ 崩溃啊，跪求指点啊，哪位高人告诉我怎么回事啊？ |
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