| 查看: 1013 | 回复: 4 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
崩溃啊！！！关于转化
|
||
|
使用Ferments公司的NotI,NocI内切酶 双酶切pET22b及目的基因（37度，3小时），T4连接酶连接过夜，化学转化E.coli Bl21或JM109或DH5a，涂布SOB培养基，就出现以下情况： 1 ：携带目的基因的菌不长，而阳性对照长的很好 2：这样做几次后，尝试使用JM109，结果。。。阳性对照和目的克隆都不长，抓狂ing 3：好不容易长了几个克隆，挑取后于含Amp的LB培养基中，就是不长，无语问苍天 一气之下，改用电转，结果 克隆确实长出来，挑取的菌落也在含Amp的LB培养基中生长良好，菌液PCR也能观察到目的条带 但是，但是！！！送去测序，竟然又出现这样的情况 1· 提不出质粒 2 即使提出质粒，T7启动子测序无信号！！ 3 刚刚好不容易有一个样品有信号，将之通过BLastX与原来的序列 比对，竟然发现没有相似性！！！！ 苍天啊，大地啊！！ 测序都做了快2个月了，就这么简单的转化，做了一个学期了！！！！！！ 崩溃啊，跪求指点啊，哪位高人告诉我怎么回事啊？ |
回复此楼» 猜你喜欢
一志愿华中农业071010，320求调剂
已经有4人回复
-
药学求调剂
已经有13人回复
-
求调剂推荐
已经有4人回复
-
290调剂生物0860
已经有40人回复
-
085400电子信息类（川大控制工程）求调剂可跨专业 求老师联系
已经有6人回复
-
材料工程281还有调剂机会吗
已经有42人回复
-
273求调剂
已经有6人回复
-
药学305求调剂
已经有6人回复
-
求调剂学校
已经有12人回复
-
山东省基金2026
已经有8人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助关于转化的问题？
已经有22人回复
- 【求助/交流】这是什么菌啊，为什么送公司鉴定都说失败呢，崩溃
已经有34人回复
4楼2017-06-11 19:04:40
anlewo7777
木虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 1786.8
- 散金: 7
- 红花: 3
- 帖子: 341
- 在线: 108.3小时
- 虫号: 314883
- 注册: 2007-02-25
- 性别: GG
- 专业: 微生物
2楼2011-07-14 16:19:53
anlewo7777
木虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 1786.8
- 散金: 7
- 红花: 3
- 帖子: 341
- 在线: 108.3小时
- 虫号: 314883
- 注册: 2007-02-25
- 性别: GG
- 专业: 微生物
3楼2011-07-14 16:25:11
wang_xiaoxu
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 180.5
- 帖子: 2
- 在线: 11.6小时
- 虫号: 6051001
- 注册: 2017-03-19
- 性别: MM
- 专业: 兽医寄生虫学
5楼2017-10-26 20:11:47
