应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于转录组测序建库的问题
41/1返回列表
查看: 3951  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ocean_chris

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于转录组测序建库的问题 已有2人参与

最近在了解一些高通量测序相关的知识，对建库方面有些不了解，所以想请了解的大神帮忙解答一下。不胜感激！
     1. 转录组测序在建库时有一步是RNA片段反转录合成cDNA第一链，然后再合成第二链cDNA，之后加测序接头，最后PCR扩增建库。这里为什么要合成第二链后才加接头？为什么不直接在第一链加接头就直接PCR扩增？这样在PCR扩增的时候不也一样合成了第二链了吗？
     2. 还有一种连特异性建库的时候，是在第二条链合成的时候用U代替T，然后双链加接头，之后降解掉含U的第二条链，最后也要PCR富集建库，这里不明白的是降解掉第二条链了之后又PCR的话，不久又有第二条链合成了吗？
       还请大家帮忙解答一下~谢谢~
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

高通量测序

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-07-07 13:46:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

he龙行天下

木虫 (小有名气)
同求答案

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼
2楼2015-07-07 23:34:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

great07225388

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.大哥，如果在第一链上加接头，你一条单链怎么做pcr反应？两条引物怎么结合模板？2.是pcr完之后加ung酶降解的，不是降解之后pcr的。艾玛，打字打的我手疼。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2015-07-10 00:41:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

查找文献

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

接头是双链的，链特异建库只是以一条链做模板，最后文库还是双链。
赞一下 回复此楼
4楼2017-03-07 15:56:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ocean_chris 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭