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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于转录组测序建库的问题
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ocean_chris

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于转录组测序建库的问题 已有2人参与

最近在了解一些高通量测序相关的知识，对建库方面有些不了解，所以想请了解的大神帮忙解答一下。不胜感激！
     1. 转录组测序在建库时有一步是RNA片段反转录合成cDNA第一链，然后再合成第二链cDNA，之后加测序接头，最后PCR扩增建库。这里为什么要合成第二链后才加接头？为什么不直接在第一链加接头就直接PCR扩增？这样在PCR扩增的时候不也一样合成了第二链了吗？
     2. 还有一种连特异性建库的时候，是在第二条链合成的时候用U代替T，然后双链加接头，之后降解掉含U的第二条链，最后也要PCR富集建库，这里不明白的是降解掉第二条链了之后又PCR的话，不久又有第二条链合成了吗？
       还请大家帮忙解答一下~谢谢~
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1楼 2015-07-07 13:46:24
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he龙行天下

木虫 (小有名气)
同求答案

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2015-07-07 23:34:51
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great07225388

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.大哥，如果在第一链上加接头，你一条单链怎么做pcr反应？两条引物怎么结合模板？2.是pcr完之后加ung酶降解的，不是降解之后pcr的。艾玛，打字打的我手疼。

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2015-07-10 00:41:33
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金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

接头是双链的，链特异建库只是以一条链做模板，最后文库还是双链。
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4楼2017-03-07 15:56:57
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