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ocean_chris

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于转录组测序建库的问题 已有2人参与

最近在了解一些高通量测序相关的知识,对建库方面有些不了解,所以想请了解的大神帮忙解答一下。不胜感激!
     1. 转录组测序在建库时有一步是RNA片段反转录合成cDNA第一链,然后再合成第二链cDNA,之后加测序接头,最后PCR扩增建库。这里为什么要合成第二链后才加接头?为什么不直接在第一链加接头就直接PCR扩增?这样在PCR扩增的时候不也一样合成了第二链了吗?
     2. 还有一种连特异性建库的时候,是在第二条链合成的时候用U代替T,然后双链加接头,之后降解掉含U的第二条链,最后也要PCR富集建库,这里不明白的是降解掉第二条链了之后又PCR的话,不久又有第二条链合成了吗?
       还请大家帮忙解答一下~谢谢~
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he龙行天下

木虫 (小有名气)

同求答案

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2015-07-07 23:34:51
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great07225388

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.大哥,如果在第一链上加接头,你一条单链怎么做pcr反应?两条引物怎么结合模板?2.是pcr完之后加ung酶降解的,不是降解之后pcr的。艾玛,打字打的我手疼。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-07-10 00:41:33
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查找文献

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

接头是双链的,链特异建库只是以一条链做模板,最后文库还是双链。
4楼2017-03-07 15:56:57
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