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a13515517892

木虫 (小有名气)

[求助] 关于蛋白表达多个起始密码子的问题求教 已有1人参与

初做蛋白表达的实验,有许多不懂的,最近的实验是蛋白表达,老板说我的序列会移码,我使用的克隆位点是SmaI-ClaI,紧接着SmalI的序列ATGAAAAA……已经有两个起始密码子了,要保证我插入的序列不移码的情况下,在SmaI(cccggg后面加个碱基)这样不会移码,但是翻译出来的蛋白是从哪里开始的呢?

关于蛋白表达多个起始密码子的问题求教
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a13515517892

木虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by liubx1006 at 2015-07-03 16:49:26
你用的vector NTI 吗?不知道你的蛋白表达是以上面链为正向,还是以下面链?你所说的SMA1后面的序列ATGAAAAA是3‘到5’顺序的,正常序列不能这么看的。一般的DNA序列是按5‘到3’顺序,即上面的链是正向读,反相链是 ...

你还没我专业啊,我最后合成做出来的序列肯定是上面的链按5‘到3’顺序至于其他的什么酶切不完全,这都不是你需要考虑的哦,我可以切开哈
3楼2015-07-03 17:31:58
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liubx1006

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你用的vector NTI 吗?不知道你的蛋白表达是以上面链为正向,还是以下面链?你所说的SMA1后面的序列ATGAAAAA是3‘到5’顺序的,正常序列不能这么看的。一般的DNA序列是按5‘到3’顺序,即上面的链是正向读,反相链是倒着读。另外,你的酶切位点选的有些近,做酶切的话不一定切彻底了,还有sma1是平末端,25°做酶切,Cla1是37度酶切……
2楼2015-07-03 16:49:26
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